T∕CVMA 95-2022 小反刍兽疫病毒时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法

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1、ICS11.220B41团体标准T/CVMA95—2022小反刍兽疫病毒时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法TRFIAfordetectionofantibodiesagainstPestedesPetitsRuminantsVirus2022-08-12发布2022-08-12实施中国兽医协会发布T/CVMA95—2022前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由洛阳现代生物技术研究

2、院有限公司提出。本文件由中国兽医协会归口。本文件起草单位：洛阳现代生物技术研究院有限公司、青海省动物疫病预防控制中心、洛阳莱普生信息科技有限公司。本文件主要起草人：郎洪武、孙雨、袁忠勋、王善普、蔡金山、张志平、阚威、游潇倩、耿玉静、吴彬、原小燕、白雪、张鹏翼、李勤楠。IT/CVMA95—2022小反刍兽疫病毒时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法1范围本文件规定了小反刍兽疫病毒时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法的试剂与耗材、器材与设备、技术原理、操作步骤、实验成立条件、结果判定等内容。本文件适用于检测羊全血或血清中的小反刍兽疫病毒抗体

3、，用于小反刍兽疫病毒抗体的免疫筛查和辅助诊断。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1时间分辨荧光免疫层析技术TimeResolvedFluorescenceImmunochromatographyassay（TRFIA）是以时间分辨荧光微球作为示踪物，将抗原抗体固

4、定在硝酸纤维素膜上，通过层析来呈现免疫反应结果的一种新型免疫分析技术。4符号与缩略语下列缩略语适用于本文件。BSA：牛血清白蛋白5试剂与耗材5.1小反刍兽疫病毒荧光微球抗体检测卡，按照附录A制备。5.2相关试剂配制，按照附录B配制。5.3小反刍兽疫抗体阳性血清，按照附录C制备。5.4微量毛细采样管（10µL）。1T/CVMA95—20225.5移液枪（10µL～100µL）。5.6便携式免疫荧光分析仪及配套ID卡，能在荧光检测波段365/610nm条件下检测，按照附录D操作。5.7注射器（5mL）。6技术原理采用时间分辨荧光免

5、疫层析技术和双抗原夹心法结合技术，检测小反刍兽疫抗体。通过样本与荧光微球标记物沿层析膜移动，样本中羊小反刍兽疫病毒抗体与荧光微球标记物、检测线（T线）上的抗原结合而产生荧光信号值（T值），荧光微球标记物继续移动与质控线（C线）上的抗体结合产品荧光信号值（C值），仪器计算出T/C值即为PPRV抗体检测值。7操作步骤7.1实验前准备7.1.1样品采集按照NY/T541-2016中规定进行样本的采集与处理，并做好个人防护。进行被检羊只静脉无菌采血，不少于2mL。室温静置于斜面2h，待血液自然凝固后，置2℃～8℃冰箱中放置不少于2h，

6、4000r/min离心10min。用移液枪小心吸出上层血清。血清应清亮，无溶血、无污染。若无上述条件分离血清，可直接用被检羊只全血检测。全血样品容器中应加0.1%肝素钠、阿氏液、3.8%～4.0%枸橼酸钠（0.1mL可抗1mL血液）或乙二胺四乙酸（EDTA）等抗凝剂，采血后充分混合。7.1.2血清样本的存放与运送按照NY/T541-2016中规定进行血清样本的存放与运输。血清样本若在一周内检测，可置2℃～8℃条件下保存。若超过一周检测，应置于-20℃以下冷冻保存。运输时注意冷藏，确保样品清亮无污染。采集的血清样本可用冰袋或保温

7、桶加冰密封等方式运输，运输时间应尽量缩短。按照相关规范要求进行样品的生物安全标识。7.1.3全血样本的存放与运送按照NY/T541-2016中规定进行全血样本的存放与运输。全血样本若在24h内检测，应置于4℃条件下保存；若超过24h检测，应置于-20℃以下冷冻保存。采集的全血样本可用冰袋或保温桶加冰密封等方式运输，运输时间应尽量缩短。按照相关规范要求进行样品的生物安全标识。7.1.4仪器的准备打开便携式荧光免疫分析仪，选择待检项目；结果如需打印，同时打开蓝牙打印机，并与便携式荧光免疫分析仪连接成功。7.2样品稀释液2T/CVM

8、A95—2022将微量毛细采样管取10μL全血或血清样本加入到已备好的样本稀释液管中混匀，稀释后的样品应在1h内完成检测。可按照以下两种方式稀释：a)离心管稀释，将检测样品在1.5mL离心管中做10倍稀释并混匀。b）稀释板稀释，将检测样品在稀释板上做10倍稀释并混匀。7.3样