DB6103∕T 33-2022 奶山羊精液品质鉴定技术规范(宝鸡市)

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ICS65.020.30CCSB436103宝鸡市地方标准DB6103/T33—2022奶山羊精液品质鉴定技术规范Technicalspecificationforsemenqualityidentificationofdairygoat2022-07-30发布2022-08-30实施宝鸡市市场监督管理局发布

1DB6103/T33—2022目次前言.................................................................................II1范围...............................................................................12规范性引用文件.....................................................................13术语和定义.........................................................................14采精...............................................................................25检测...............................................................................36结果判定...........................................................................37鉴定记录...........................................................................4附录A（规范性）奶山羊精液品质显微镜检测方法.........................................5附录B（规范性）奶山羊精液分析仪检测方法.............................................8附录C（规范性）奶山羊精液品质鉴定登记表.............................................9I

2DB6103/T33—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由陇县畜产局提出。本文件由宝鸡市农业农村局归口。本文件起草单位：西北农林科技大学、陇县畜牧工作站、泾阳县动物卫生监督所、陕西省畜牧技术推广总站、陕西省畜牧产业试验示范中心、陕西和氏高寒川牧业有限公司。本文件主要起草人：边会龙、郑惠玲、朱梦笛、史怀平、王鹏飞、侯鸽利、王芳、黄桂姣、何晓学、李文亮、赵少斌、王缠石、王森、张敏飞、代军刚、张永刚。本文件由陇县畜牧工作站负责解释。本文件首次发布。联系信息：单位：陇县畜牧工作站电话：0917-4601435地址：陇县东大街126号邮编：721200II

3DB6103/T33—2022奶山羊精液品质鉴定技术规范1范围本文件规定了奶山羊精液品质鉴定的术语和定义、采精、检测、结果判定和鉴定记录的要求。本文件适用于奶山羊种公羊原精液品质鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB20557-2006山羊冷冻精液NY/T1234-2018牛冷冻精液生产技术规程NY/T3186-2018羊冷冻精液生产技术规程3术语和定义NY/T1234、NY/T3186界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1种公羊studbuck符合奶山羊品种标准、具有种用价值并参与正常配种的公羊。3.2采精semencollection使用采精器以获得公羊精液的操作方法。[来源：NY/T3186-2018，定义3.2]3.3精液semen由精子和精清两部分组成的混合液体。精子悬浮在液状的精清中。3.4原精液originalsemen采集后未经稀释处理的精液。[来源：NY/T3186-2018，定义3.1]3.5采精量volumeperejaculate种公羊一次采精时排出的精液量。[来源：NY/T1234-2018，定义3.6，有修改]3.6精子密度spermdensity8单位体积精液中的精子数。单位为10个/mL。1

4DB6103/T33—2022[来源：NY/T3186-2018，定义3.3]3.7前进运动精子数progressivemotility每毫升精液中呈前进运动的精子数。[来源：GB20557，定义3.1]3.8精子活力spermmotility在37℃环境下，精液中直线前进运动的精子数占总精子数的百分率。[来源：GB20557，定义3.2，有修改]3.9精子活率spermmotilitypercentage在37℃环境下，精液中活精子数占总精子数的百分率。3.10精子畸形率abnormalspermpercentage精液中畸形精子占总精子数的百分率。[来源：GB20557，定义3.3]4采精4.1基本要求4.1.1种公羊应符合GB20557-2006中4.1的要求。4.1.2采精员经专业培训，取得相关资质。4.1.3采精室地面清洁防滑，温度舒适，避免太阳光直射，环境安静。4.1.4精液处理室应符合NY/T3186-2018中4.1的规定，地面清洁，室温控制在18℃～25℃。4.1.5稀释液商品稀释液按产品说明书使用。自制稀释液应按附录A.2.2.1精液的稀释方法配置。4.1.6器械清洗消毒应按NY/T3186-2018中附录A的要求执行。4.2精液采集4.2.1采精应按NY/T3186-2018中第5章的要求执行。用电子采精器时，按产品说明书操作。2

5DB6103/T33—20224.2.2采精频次配种季节，1.5岁左右的青年种公羊采精≤2次/d，2.5岁以上成年种公羊采精3次～4次/d。每天连续采精2次以上时，中间间隔30min～60min。5检测5.1精液处理精液采集后，做好标记，30min内常温避光保存，立即处理并检测。精液处理时放置在32℃～34℃恒温水浴锅中，完成检测。5.2检测项目5.2.1感官检测5.2.1.1射精量用2mL吸管将集精杯的原精液吸入有刻度的集精管中，通过刻度管上的刻度值测量精液的量值（mL）。5.2.1.2颜色目测集精杯或集精管中原精液的颜色。5.2.1.3云雾状目测集精杯或集精管中的精液，精液呈翻腾滚动的云雾状态。5.2.1.4气味一只手将装有原精液的集精杯或集精管放在距鼻子10cm～20cm处，另一只手在瓶口轻微扇动，嗅闻精液气味。5.2.1.5pH用玻璃棒蘸取1滴精液于精密pH试纸上，对照比色。或用酸度计测定。5.2.1.6杂质将装有原精液的集精杯或集精管放在光线充足处观察。5.2.2实验室检测5.2.2.1显微镜检测应按附录A规定的方法测定。5.2.2.2精液分析仪检测应按附录B规定的方法测定。6结果判定6.1判定要求3

6DB6103/T33—2022评价种公羊时，每采精1次检测1次，取3次检测结果平均值，进行判定。6.2感官检测判定6.2.1原精液，乳白色或乳黄色、有云雾状、无味或略腥、pH6.4～7.1、无杂质，判定为合格精液。6.2.2感官检测判定为不合格的精液，均不做实验室检测。6.3实验室检测判定86.3.1原精液，精子密度≥20×10/mL，精子活力≥70%，精子畸形率≤14％，判定为合格精液。6.3.26.3.1中任何一项不达标，均判定为不合格精液。7鉴定记录7.1鉴定记录应符合附录C的规定。7.2鉴定记录保存2年以上。4

7DB6103/T33—2022AA附录A（规范性）奶山羊精液品质显微镜检测方法A.1精子密度测定A.1.1仪器、试剂血球计数器、红细胞吸管或移液器、2mL吸管、显微镜或显微电视装置、显微镜保温箱或恒温装置、药棉、小试管、试管架、水浴锅、白绸布；3.0%氯化钠溶液、蒸馏水、95%酒精、乙醚。A.1.2方法A.1.2.1精液稀释A.1.2.1.1红细胞吸管稀释：用红细胞吸管吸取原精液，吸至“0.5”刻度处，用药棉擦去吸管尖端外围附着的精液，再吸3.0%氯化钠至“100”刻度，用拇指和食指堵住吸管两头来回摇动混匀，成为200倍稀释精液。A.1.2.1.2移液器稀释：用移液器吸取10L原精液，再加入1990L（在小试管内先配制2mL，再吸出10L弃去）3.0%氯化钠，混匀，成为200倍稀释精液。A.1.2.2精液计数A.1.2.2.1将盖好盖玻片的血球计数板置于显微镜下低倍观察（显微镜恒温台温度37℃），找到清晰的计数室。弃去吸管或移液器中的前2滴，再将尖端置于血球计数室和盖玻片交界处的边缘上，精液自动渗入计数室内。要求精液均匀充满计数室，无气泡、不溢出。静置2min，开始计数。A.1.2.2.2将充满精液的血球计数板置于显微镜下放大250倍～400倍或电子荧光屏上观察计数，数出四角和正中间5个中方格（80个小方格）中的精子数和直线前进运动的精子数。精子压住血球计数室的线，以精子头为准，按照“数上不数下，数左不数右”的原则计数。每个样品重复测定3次，取平均值。A.1.3计算A.1.3.1精子密度精子密度按公式（A.1）计算：1mL原精液内的精子数=5个中方格的精子数×5×10×1000×精液稀释倍数………………….(A.1)A.1.3.2前进运动精子数按GB20557-2006附录A.4的方法测定。A.1.3.3精子活力cM100精子活力按式（A.2）计算：………………………………………(A.2)s式中:M——精子活力;C——直线前进运动精子数，单位为个;5

8DB6103/T33—2022S——精子总数，单位为个。A.2精子活率测定A.2.1仪器、试剂2mL吸管、试管、试管架、水浴锅、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜或显微电视装置；5%伊红、1%苯胺黑。A.2.2方法A.2.2.1染色将5%的伊红和1%苯胺黑按1:1混匀，分装于1mL～2mL容量的试管中，并在37℃水浴锅中加温，随后加入原精液1滴～3滴，混匀后再放回水浴锅中，3min后立即取出待用。A.2.2.2抹片按GB20557-2006附录A.5.2.2.1的规定执行。A.2.2.3计数将制备好的抹片置于显微镜下放大500倍～600倍检查，数200个或500个精子，分别数出死精子数和活精子数。活精子头部透明、无色，死精子头部呈红色。A.2.3计算H精子活率按公式（A.3）计算：H1100……………………………………………(A.3)s式中：H——精子活率,%；H1——活精子数，单位为个；s——精子总数，单位为个。A.3精子畸形率测定A.3.1仪器、试剂显微镜或显微电视装置、血球计数器、小吸管或移液器、容量瓶、锥形瓶、天平、量杯、试管、试管架、过滤纸、漏斗架、漏斗、载玻片、盖玻片、1ml玻璃管、恒温箱；复红原液、95%的酒精、5%石炭酸、饱和伊红酒精、美蓝、0.01%KOH、蒸馏水、无水酒精、0.5%氯胺T、二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、40%（V/V）福尔马林溶液。A.3.2方法A.3.2.1试剂配制A.3.2.1.1复红染色液制作。复红原液（10g复红溶于100mL95%的酒精）10mL加5%石炭酸100mL。取上述混合液50mL加饱和伊红酒精25mL，放置两周后即可使用。A.3.2.1.2美蓝染色液制作。美蓝溶液（10g美蓝溶于1000mL95%的酒精）30mL加0.01%KOH100ml，过滤后再加入3倍量的蒸馏水，混合后即可使用。6

9DB6103/T33—2022A.3.2.1.3福尔马林-缓冲液制作。二水磷酸氢二钠溶液（21.82g二水磷酸氢二钠溶于500mL蒸馏水）200mL加磷酸二氢钾溶液（22.25g磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水）80mL，配制成缓冲液。取上述缓冲液100mL加40%（V/V）福尔马林溶液62.5mL再加蒸馏水至500mL。A.3.2.2头部畸形精子数A.3.2.2.1抹片按照GB20557-2006附录A.5.2.2.1的规定制作精液抹片，风干后浸入无水酒精中固定1min～2min，取出再风干。A.3.2.2.2固定浸入0.5%氯胺T中1min～2min，用清水冲洗1min～2min，再迅速通过95%的酒精，风干。A.3.2.2.3染色放入复红染色液中10min～15min。清水中蘸2次。再迅速通过美蓝染色液，清水冲洗后风干。A.3.2.2.4计数将制备好的抹片在显微镜油镜下随机观察200个以上的精子（分左、右两个区），计数头部畸形精子数取两个片区的平均值。两个片区变异系数＜20%，若＞20%重新制片。A.3.2.3尾部畸形精子数A.3.2.3.1将福尔马林-缓冲液注入1mL玻璃管，置37℃恒温箱中备用。A.3.2.3.2向装有福尔马林-缓冲液的玻璃管中注入2滴～3滴原精液充分混匀。A.3.2.3.3取一滴混匀后的精液置于载玻片上，加上盖玻片静置3min～5min。A.3.2.3.4将制备好的抹片在显微镜油镜下随机观察200个以上的精子（分左、右两个区），计数尾部畸形精子数取两个片区的平均值。两个片区变异系数＜20%，若＞20%重新制片。A.3.3计算A1精子畸形率按公式（A.4）计算：A100………………………………………(A.4)s式中：A——精子畸形率,%；A1——畸形精子数，单位为个；s——精子总数，单位为个。7

10DB6103/T33—2022BB附录B（规范性）奶山羊精液分析仪检测方法B.1仪器、试剂电脑、显微镜、电子摄像头、精子分析软件、移液器、载玻片、盖玻片或标准精子计数板、稀释液。B.2方法B.2.1送检原精液送入精液处理室后，15min内完成检测。B.2.2设置参数打开电脑，启动精子分析软件，在显示屏中选择测试参数，并进行设置。B.2.3精液稀释吸取一定量原精液和稀释液，按精子分析软件说明书的比例在试管中混匀，记录稀释比例。B.2.4注入精液将载玻片、盖玻片或精子计数板，放在37℃恒温台上预热。用移液器吸取3L～5L稀释后的精液，放在标准精子计数板凹槽边缘上，稀释后的精液自动渗入计数室；或将稀释后的精液吸取3L～5L放在37℃载玻片上，盖上37℃的盖玻片。稀释后的精液刚加入，精液或玻片会有移动，待其静止后，放在恒温台上保温。B.2.5微调显微镜调整显微镜焦距，避开玻片划痕，直到视野中精液样品清晰。B.2.6调节光亮度电脑显示屏上精子头部出现蓝色、尾部出现红色即可。B.2.7精液分析按照电脑操作步骤提示，分析精子活力和密度。B.2.8输出结果分析检测结束，按电脑提示打印检测报告。8

11CC附录C（规范性）奶山羊精液品质鉴定登记表基本信息感官检测实验室检测结果判定前进稀释精子检测场户采精送检羊只采精采精量云雾稀释精子运动精子精子不合品种颜色气味pH杂质液名畸形合格员名称时间时间耳号员(mL)状倍数密度精子活力活率格称率数DB6103/T33—20229

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