8 种常见芽菜致病微生物的分离鉴定

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1、研究论文中国蔬菜CHINAVEGETABLES2016（4）：48-528种常见芽菜致病微生物的分离鉴定123111张安华　蔡　翔　陈　涛　王　萍　祝菊红　赵志远12（武汉市农业科学技术研究院作物科学研究所，湖北武汉430345；武汉维尔福生物科技股份有限公司，3湖北武汉430345；湖北维民种苗有限公司，湖北武汉430207）摘　要：对目前产业化程度较高的黄豆、黑豆、豇豆、萝卜、蕹菜、花生、黄秋葵、向日葵等8种芽菜患病植株上的致病微生物进行分离、纯化，共得到24株细菌菌株和8株真菌菌株；利用真菌ITS和细菌1

2、6SrDNA通用引物，分别对分离得到的细菌和真菌基因组进行分子生物学鉴定。结果表明：24株细菌分属8个属，分别为克雷伯氏菌属（Klebsiella）、肠杆菌属（Enterobacter）、假单胞菌属（Pseudomonas）、不动杆菌属（Acinetobacter）、果胶杆菌属（Pectobacterium）、短稳杆菌属（Empedobacter）、戴尔福特菌属（Delftia）、从毛单孢菌属（Comamonas）；24株细菌均为革兰氏阴性菌，除果胶杆菌属外，其余都不是典型的植物病原菌；其中不动杆菌属、肠杆菌属、克雷伯

3、氏菌属和假单胞菌属的细菌出现在2种或2种以上芽菜上；另外4个属的细菌则只出现在1种芽菜上，呈现出寄主的专化性。8株真菌分属3个属，分别为镰刀菌属（Fusarium）、链格孢属（Alternaria）和根霉属（Rhizopus）；其中根霉属和链格孢属的真菌分别只出现在萝卜芽菜和蕹菜芽菜上，其他6种芽菜上分离得到的真菌菌株均属于镰刀菌属。分离菌株回接试验结果表明，所有菌株均能对芽菜造成不同程度的腐烂症状，生产过程中环境微生物污染同样能致芽菜腐烂病发生。关键词：芽菜；致病微生物；真菌；细菌；分离鉴定芽菜是利用农业学上的种子在特

4、定环境条件防控，而忽视了生产过程中的环境微生物污染。下培育出的可供食用的芽苗类蔬菜的总称，具有适本试验以目前产业化程度较高的黄豆、黑豆、用品种多、生长周期短、单位产值高、易于工厂化豇豆、萝卜、蕹菜（空心菜）、花生、黄秋葵和向生产等产品特性，以其安全、营养、保健等特点走日葵等8种芽菜为试验材料，对患病植株上的微生入百姓餐桌（康玉凡等，2008）。据统计，目前国物进行采集、分离和菌株纯化，采用分子生物学与内市场上常见的芽苗菜种类达30种之多（袁星星形态学相结合的方法对微生物进行鉴定，确定病原等，2014）。工厂化生产过程

5、中，芽菜腐烂问题一微生物类型与致病性，旨在为科学高效防治芽菜腐直困扰着生产企业，每年因芽菜腐烂造成的损失可烂病提供理论参考。达10%（李振华等，2011；袁星星等，2014）。张1　材料与方法丽等（2010，2011）对国内多家工厂化生产的芽菜进行取样、鉴定，发现豆类芽菜生产中的主要真菌1.1　样品采集、分离及菌株纯化病害是瓜果腐霉菌（Pythiumaphanidermatum）以2014年3～6月，分别从湖北玉如意芽业集团及立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）引起的腐烂病。和湖北维民种苗公司生产车间选取

6、黄豆、萝卜、蕹生产实践中，不同种类和品种的芽菜感病症状和程菜、花生、豇豆、黑豆、黄秋葵和向日葵等8种芽度不尽一致，且表现出极强的季节差异。目前，国菜中有腐烂症状的患病植株，每种芽菜取15～25内针对芽菜烂种、烂芽的研究多集中于种子带菌的株，共取样180株。采用常规组织分离法进行病原物分离。培养过张安华，男，高级农艺师，专业方向：作物栽培，E-mail：程中，若长出真菌则直接将其转接至PDA平板上，1259157360@qq.com培养5d后挑取菌落边缘菌丝块接种至新的PDA平收稿日期：2015-10-21；接受日期：

7、2016-01-24基金项目：武汉市科技局关键技术攻关项目（2014020202010135）板上进行培养，重复进行3次，得到纯化的真菌；—48—《中国蔬菜》学术论文下载www.cnveg.org中国蔬菜CHINAVEGETABLES研究论文若长出细菌则采用接种环在NA平板上划线，培养择2条引物（包含引物）之间的序列，通过BLAST24h后挑取单菌落在NA平板上进行培养，重复进（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/blast）程序与GenBank行3次，得到纯化的细菌（方中达，1996）。

8、核酸数据库进行比对。1.2　病原微生物形态学鉴定1.5　分离菌株回接试验将纯化的细菌菌株置于NA平板上，真菌菌株选取生产实践中发病较严重且表面分离到的置于PDA平板上，在25℃条件下进行培养，细菌微生物种类较多的萝卜和蕹菜进行细菌回接试验，培养24h；真菌培养5～10d。观察、记载菌落培采用黑豆进行真菌回接试验