btcry1ac_badh双价基因对烟草的遗传转化及表达检测

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1、第２９卷第２期河北林果研究Ｖｏｌ．２９Ｎｏ．２２０１４年６月ＨＥＢＥＩＪＯＵＲＮＡＬＯＦＦＯＲＥＳＴＲＹＡＮＤＯＲＣＨＡＲＤＲＥＳＥＡＲＣＨＪｕｎ．２０１４文章编号：１００７－４９６１（２０１４）０２－０１６９－０６ＤＯＩ：１０．１３３２０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｈｊｆｏｒ．２０１４．００３７ＢｔＣｒｙ１Ａｃ、ＢＡＤＨ双价基因对烟草的遗传转化及表达检测刘娇娇１，王桂英２，任亚超１，董研１，徐丽娜２，梁海永１（１河北农业大学林学院，河北保定０７１０００；２廊坊市农林科学院，河北廊坊０６５０００）摘要：利用农杆菌介导法，将植物转化载体ｐ２０９

2、－ＢｔＣｒｙ１Ａｃ－ＢＡＤＨ转化烟草，获得了Ｋａｎ筛选的完整再生植株。经ＰＣＲ检测证明，４个株系中检测到ＢｔＣｒｙ１Ａｃ和ＢＡＤＨ基因。荧光定量ＰＣＲ检测表明，检测到目的基因的株系中有３个株系的２个目的基因均在转录水平得到表达，且存在表达差异；有１个株系未检测到ＢＡＤＨ基因的表达。ＥＬＩＳＡ毒蛋白检测表明，经荧光定量ＰＣＲ筛选的３个株系均检测到毒蛋白的表达，含量最高为４１４．６３ｎｇ／ｇ。室内饲虫试验表明，３个转基因株系中只有２个株系对斜纹夜蛾幼虫表现出抗虫性，校正死亡率最高为３８．２％，其余均未表现出明显抗虫性。选取２个株系进行

3、组培苗耐盐试验，表明在不同ＮａＣｌ浓度下，转基因株系与对照之间没有明显差异。研究中，有些系号经ＰＣＲ检测说明ＢｔＣｒｙ１Ａｃ和ＢＡＤＨ基因已整合到植物基因组中，但荧光定量ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ检测表明虽然基因整合到植物基因组中却未表达，有可能发生了基因沉默。关键词：ＢｔＣｒｙ１Ａｃ；ＢＡＤＨ；烟草；遗传转化；表达检测中图分类号：Ｓ７１５文献标志码：ＡＧｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｏｂａｃｃｏｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｂｙＢｔＣｒｙ１ＡｃａｎｄＢＡＤＨｂｉｖａｌｅｎｔｇｅｎｅ１，

4、ＷＡＮＧＧｕｉ－ｙｉｎｇ２，ＲＥＮＹａ－ｃｈａｏ１，ＤＯＮＧＹａｎ１，ＸＵＬｉ－ｎａ１，ＬＩＡＮＧＨａｉ－ｙｏｎｇ１ＬＩＵＪｉａｏ－ｊｉａｏ（１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｒｅｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１０００，Ｃｈｉｎａ；２ＬａｎｇｆａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，Ｌａｎｇｆａｎｇ０６５０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｂａｃｃｏｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｂｙｐｌａｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐ２

5、０９－ＢｔＣｒｙ１Ａｃ－ＢＡＤＨｔｈｒｏｕｇｈＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ，ｔｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｓｃｒｅｅｎ－ｉｎｇｏｆＫａｎａｍｙｃｉｎ．４ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓｔｈａｔｄｅｔｅｃｔｅｄＢｔＣｒｙ１ＡｃａｎｄＢＡＤＨｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｆｔｅｒＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｗｏｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｗｅｒｅｅｘ－ｐｒｅｓｓｅｄａｔｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏ

6、ｎａｌｌｅｖｅｌｉｎ３ｌｉｎｅｓｔｈａｔｄｅｔｅｃｔｅｄａｌｌｔｈｅｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓ，ａｎｄｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｏｍｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｈｅｓｅｌｉｎｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＡＤＨｉｎａｌｉｎｅｗａｓｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＥＬＩＳＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎｉｎ３ｌｉｎｅｓｓｃｒｅｅｎｅｄｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｗｉｔｈｔｈｅｍａ

7、ｘｉｍｕｍｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎｏｆ４１４．６３ｎｇ／ｇ．ＡｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｌｉｎｅｗｉｔｈｄｅｔｅｃｔｅｄＢｔＣｒｙ１Ａｃｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｉｎｄｏｏｒｉｎｓｅｃｔｓ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｅｓｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｏｎｌｙ２ｌｉｎｅｓ收稿日期：２０１４－０４－０１；修改稿收期：２０１４－０４－２０基金项目：国家高技术研究发展计划“８６３”计划“杨树分子育种与品种创制”（２０１１ＡＡ１００２０１）。作者简介：刘娇娇（１９８８－），女，河北石家庄人

8、，在读硕士研究生，研究方向为林木遗传育种。通讯作者：梁海永（１９７３－），男，河北唐山人，副教授，研究方向为林木遗传育种。１７０河北林果研究第２９卷ｉｎｔｈｅ３ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔＰｒｏ