双孢蘑菇液体菌种再固化应用研究

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1、栽培技术diblefungi2014（2）双孢蘑菇液体菌种再固化应用研究*韩文清张锐赵德胜钟彩霞元向东（包头轻工职业技术学院，内蒙古包头014035）摘要通过将发酵培养的双孢蘑菇二级液体菌种接入固体培1000mL，pH6.5。用于二级液体菌种发酵罐培养。④固体原养基，来获得三级固料栽培种，并接入麦草腐熟料出菇试验；同种培养基（1kg料）：小麦970g，粪草10g，石灰10g，石膏时与使用传统方法制作的固体菌种进行产量的对比，结果无明10g，料水比1∶1.5，pH6.5。⑤固体栽培种培养基（1kg料）：显差异。采用传统制种方法，原种、栽培种培养总需71d以上；小

2、麦890g，麸皮80g，粪草10g，石灰10g，石膏10g，料水而采用液体培养代替固料原种制作，再进行固体栽培种培养总比1∶1.5，pH6.5。⑥麦草栽培腐熟料（1kg料）：麦秸600g，牛需48d，节约了接近32%的时间。采用液体二级发酵培养再结马粪（干）270g，饼肥70g，尿素5g，石膏30g，过磷酸钙15g，合固化培养制种，体现出液体菌种很大的优越性，而且此方法石灰10g，料水比1∶1.5，pH6.5。在实际生产中稳妥可行，值得推广。1.2试验方法关键词双孢蘑菇液体菌种固化培养栽培实验1.2.1菌种制备文章编号1000-8357（2014）01-004

3、0-021.2.1.1斜面菌种活化将双孢蘑菇冰箱保存种接种于斜面双孢蘑菇是近年来我国许多地方大力发展的一种优质培养基上，于25℃培养7d。草腐型食用菌。它尤其适宜于在我国北方地区栽培，原因是1.2.1.2一级摇瓶菌种制备按常规方法制备液体培养基后北方地区昼夜温差大，栽培原料充足，牲畜粪便和小麦秸秆分装于500mL三角瓶中，装液量200mL，棉塞封口，0.1MPa来源广、价格低。因此在内蒙古的主要产麦区利用农闲栽培下灭菌30min，冷却。将活化斜面母种割成大小约0.5cm2的双孢蘑菇可获得较好的经济效益，可是现在的菌种生产技术小块，分别挑取接到液体培养基中，每瓶

4、接半支斜面[3]。于却制约着食用菌栽培的迅速发展。25℃先静置24h，然后置恒温振荡器中，25℃、转速150r/min，目前，双孢蘑菇菌种仍采用固体发酵法生产。液体振荡培养5~6d，得一级摇瓶菌种。菌种虽能够克服传统的固体菌种生产周期长、菌龄不一1.2.1.3原种及栽培种的传统制备常规方法制作原种和栽致等缺点；但对生产工艺及技术条件要求高，目前多数试培种培养基。灭菌冷却后，将活化的斜面母种分割成大小验仍停留在液体发酵工艺的研究阶段。以致液体菌种用约0.5cm2的小块，每瓶原种（750mL）接入一小块；待菌丝于栽培生产食用菌子实体一直未能在国内生产上得到推长满瓶

5、后接入栽培种袋料中，聚丙烯栽培种袋的规格为，广应用。折12cm×18cm×0.005cm，一端封口，每瓶接原种数粒；接种笔者在采用双孢蘑菇液体菌种发酵工艺最新研究成果[1]后材料皆于22~25℃条件下培养。基础上，将双孢蘑菇液体菌种应用于栽培试验，同固体菌种1.2.2液体菌种扩大培养对比，以期为液体菌种技术推广做些积极的尝试。1.2.2.1发酵罐液体菌种培养采用江苏达森DS-Y-10L智1材料与方法能控制搅拌式发酵系统，装液量为6L，按照5%（V/V）[2]接种量接入检验合格的三角瓶液体菌种，培养温度为25℃、初始1.1供试材料pH6.5、转速控制在60~10

6、0r/min、通风量为1V/V/min[4]，培养1.1.1供试菌株双孢蘑菇2796，由华中农业大学菌种中心时间控制在5~6d，每间隔24h取样一次，进行镜检、涂平板，提供。作染菌检测；同时测定菌丝球生物量、菌丝球密度[4]、还原糖1.1.2培养基①马铃薯完全培养基[2]：马铃薯200g，蔗糖含量[5]。20g，KH2PO42g，MgSO4·7H2O0.1g，琼脂20g，水1000mL，1.2.2.2发酵终点的判断据发酵液生化指标的变化，以培pH自然。用作斜面及平皿培养基。②摇瓶菌种培养基：养到第6天（≥120h）、菌丝球生物量接近12g/100mL、还原糖1

7、2Be麦芽汁30mL，玉米粉10g，KH2PO41g，MgSO40.5g，值下降到1g/100mL以下时，作为综合判断发酵培养的终点。VB110mg，水1000mL，pH6.5。用于一级液体菌种培养。③1.2.2.3菌丝球生物量的测定取已长好的培养物100mL，液体菌种发酵培养基：麸皮20g，玉米粉10g，蛋白胨1g，经3000r/min离心10min，置滤纸上吸干后用电子天平称菌KH[3]，水2PO40.8g，MgSO40.5g，VB110mg，新鲜食用油0.05%丝球湿重。收稿日期：2013-06-09一稿；2013-07-26修改稿。1.2.3液体菌种固

8、化培养常规方法制作栽培种培养基。基金项