猪肠道主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析

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1、·４８·《上海畜牧兽医通讯》２０１４年第６期猪肠道主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析吴燕燕１２３４刘伟林世光王斌仙（１宁波市鄞州区畜牧兽医站宁波鄞州３１５０００２中牧实业股份有限公司北京丰台１０００７０３宁波市鄞州区集士港镇农办宁波集士港镇３１５１７１４宁波市鄞州区首南街道办事处经济发展科宁波首南街道３１５１９４）【摘要】对８个养猪场的５５份肠道样本进行病原菌分离鉴定，并对主要病原菌进行药敏试验。结果显示，分离到的病原菌主要为沙门氏菌和大肠杆菌，此外个别样本中可见嗜麦芽窄食单胞菌和产碱菌属；该分离病原菌对

2、诺氟沙星、环丙沙星、青霉素、氨苄西林和头孢噻吩的耐药性较高，对阿米卡星、氟苯尼考和庆大霉素的耐药性较低。关键词：腹泻；沙门氏菌；大肠杆菌；耐药性DOI:10.14170/j.cnki.cn31-1278/s.2014.06.019２０１４年梅雨季节，宁波鄞州区部分猪场受强降药物的筛选提供试验数据，从而指导临床进行合理水影响严重，造成这些猪场腹泻病例大量发生，对有效地应用抗生素。猪场造成严重经济损失。猪细菌性腹泻病是危害１材料与方法养猪业的重要传染病，对仔猪的危害最为严重，可１．１试验材料造成仔猪的死亡；

3、育肥猪发生细菌性腹泻则会出现１．１．１调查对象：对来自宁波鄞州区的３个规模牧生长发育受阻，饲料报酬降低，影响养殖效益。场及５个散养户的仔猪进行调查。猪的细菌性腹泻病最常见的是猪大肠杆菌病１．１．２试验材料：采集来自各猪场的肠道样本〔１〕和猪沙门氏菌病，此外还有肺炎克雷伯菌、嗜麦芽５５份。窄食单胞菌和产碱菌属等。猪大肠杆菌病是由致１．１．３药敏纸片：诺氟沙星、阿米卡星、氟苯尼考、病性大肠杆菌引起的，本病的主要传染源是带菌母环丙沙星、青霉素、庆大霉素、氨苄西林和头孢噻吩猪，通过粪便排菌或仔猪哺乳或舔母猪皮肤

4、时感染均为杭州天和微生物试剂有限公司生产。仔猪，病仔猪又从粪便排菌，污染环境，通过水、饲１．１．４培养基：普通培养基、营养肉汤培养基、７％料和用具传染给其它母猪，形成新的传染源。仔猪绵羊鲜血琼脂培养基均按照参考文献〔２〕制备，Ｍ－Ｈ对本病的易感性与日龄有关，本病的流行无季节琼脂加５％牛血清为杭州天和微生物试剂有限公司性。猪沙门氏菌病又称猪副伤寒，是由沙门氏菌属产品。细菌引起的。病猪和带菌猪是本病的主要传染源，１．１．５细菌检测仪：法国生物ＡＴＢ自动细菌鉴定可从粪便、尿、乳汁以及流产的胎儿胎衣和羊水排仪，

5、法国梅里埃公司产品。菌。本病主要经消化道感染，也可以经交配和人工１．２试验方法授精感染。１～４月龄仔猪对本病的易感性较高，但１．２．１细菌培养：将肠道样本分别接种于上述培在初乳中无抗体或处于不良环境时，发病则不受年养基，３７℃下培养２４ｈ后进行分离纯化。龄的限制，如饲养管理失当、气候突变或长途运输１．２．２ＡＴＢ细菌鉴定仪鉴定法：根据细菌表型特等，尤其是在患有猪瘟时，往往发生本病的并发和征选择相应的鉴定板条，通过阅读器自动阅读测试继发感染。板条，依据试条上的生化反应数据进行统计分析，细菌的耐药性是感染领

6、域中的热点问题，随着依据相似程度（Ｔ值）及百分率（ＩＤ％）的组合作出近年来抗生素的普遍应用，耐药菌株及抵抗的药物判断。ＲａｐｉｄＩＤ３２ＳＴＲＥＰ和ＩＤ３２ＳＴＲＡＰＨ２种种类日益增多，各种致病菌的耐药率明显升高，有〔３〕鉴定板条，加指示剂后５～１０ｍｉｎ内测定。些细菌甚至存在多重耐药，各种病原微生物均可形１．２．３药敏试验：采用Ｋ－Ｂ纸片法进行体外药敏成耐药性。由于细菌的耐药性与临床抗生素的使试验，按１９９９年美国实验室标准化委员会（ＮＣ－用密切相关，因此，了解本地区临床细菌耐药性的〔４〕ＣＬＳ）制定

7、的规则进行。分别用棉签蘸取０．１ｍＬ情况，对于指导临床合理选用抗菌药物、制定治疗来自各猪场的病原菌菌液，均匀涂布接种于Ｍ－Ｈ方案和抗菌药物临床应用策略，都有很大的参考意琼脂培养基上，作用５ｍｉｎ后，用镊子将８种药敏纸义。本研究主要针对此次检出病原菌进行抗生素片分别平贴在涂有病原菌的培养基表面，各纸片中的耐药性检测，希望为此次宁波地区流行细菌抗菌心距离应大于２４ｍｍ，待纸片干燥后置３７℃恒温箱中培养１８～２４ｈ，根据抑菌圈大小判断待测菌株基金项目：《动物细菌性疾病关键技术研究与应用》“鄞科〔２０１２〕对８

8、种药物的敏感性，判断标准见表１。１０４号文件”《上海畜牧兽医通讯》２０１４年第６期·４９·表１大肠杆菌和沙门氏菌对８种抗菌药物的药敏判断标准２结果与分析纸片药物抑菌圈直径（ｍｍ）抗菌药物２．１各猪场主要病原菌的鉴定结果含量（μｇ）耐药（Ｒ）中敏（Ｉ）敏感（Ｓ）本试验采用ＡＴＢ细菌鉴定仪对从各猪场分离诺氟沙星５≤１５１６～２０≥２１阿米卡星３０≤１４１５～１６≥１７到的细菌进行自动化检测，３个规模牧场各采集肠氟苯尼考３０≤１４１５～１８≥１９