肉鸡鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

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1、基础研究中国畜牧兽医文摘2014年30卷第11期肉鸡鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验蒋勇军（扬州市广陵区沙头镇畜牧兽医技术推广服务站，江苏扬州225105）沙门氏菌病是家禽的一种常见病与高发病，给家禽养殖业化特征。造成了较大的危害。沙门氏菌感染不仅引起家禽发病死亡造成严2.4　PCR鉴定[3]重的经济损失，且易污染家禽产品，成为沙门氏菌的携带者。参考相关文献针对沙门菌肠毒素stn基因设计如目前，从家禽和禽产品中分离出沙门氏菌的报道明显多于其它动下引物，目的片段大小为260bp。上游引物P1：5′-

2、物，造成这一结果的主要原因是由于沙门氏菌在被感染的家禽中CTTTGGTCGTAAAATAAGGCG-3′，下游引物P2：5′-能通过水平传播和垂直传播造成广泛流行，同时，也反映出家禽TGCCCAAAGCAGAGAGATTC-3′；无菌挑取菌落作为模板，PCR体系为[1]的饲养数量十分庞大。目前，全球已知的沙门氏菌血清型超过25μl，扩增程序：94℃5min；94℃1min、55℃1min、了2500种，分属不同的血清群，不同血清型沙门氏菌的鉴定具有72℃1min，25个循环；72℃10min。扩增产

3、物经琼脂糖凝胶流行病学意义。而与禽类感染密切相关沙门氏菌主要包括引起鸡电泳检测。结果见图1，所扩增的DNA片段大小约为260bp，和预白痢或禽伤寒的鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌，引起禽副伤寒多期片段大小一致。表明分离菌为沙门菌。种血清型（以肠炎沙门氏菌与鼠伤寒沙门氏菌为代表），以及引[3]起火鸡亚利桑那病的部分血清型。雏禽对沙门菌较为易感，感染后通常具有较高的死亡率。多年生产实践表明，由于缺乏效果确实的疫苗，因而该病的预防和治疗主要依赖于敏感抗生素，但由于抗生素在临床的长期不合理使用导致耐药菌株的不断

4、增多，使得此病防治变得较为困难。因此，在临床实践中对沙门氏菌分离菌株的耐药情况进行监测，具有非常重要的意义。1　试验背景2014年1月，在江苏省扬州市沙头镇某肉鸡养殖场饲养的雏鸡在15日龄开始陆续出现发病和死亡情况，使用恩诺沙星等药物给予治疗，疫情有所好转，但未能根治，平均死亡率超过20%。发病雏鸡主要表现为体形瘦小、精神萎顿、羽毛松乱、吃料减少或食欲废绝、排淡黄绿色至绿色稀粪、并粘污肛门周围的羽毛。剖检图1分离菌株的stn基因扩增结果病变主要表现为心包炎、肝脾肿大、胆囊充盈，部分鸡只肝脏有M.DN

5、AMarkerDL2000；1.阴性对照2.分离菌stn基因扩增条带白色结节等。为确诊，找出治疗该次疫情的药物，特进行了本试2.5　血清学分型验。在洁净的玻片上滴加1滴沙门氏菌属诊断血清（购自宁波天润2　细菌分离与鉴定生物药业有限公司），将分离菌加入少量灭菌生理盐水中制成浓2.1　病料采集与培养菌液，然后取少量菌液滴到血清中，混合均匀2min内判定结果。现场无菌采集发病鸡的心血、肝脏、脾脏、胆囊、胰腺、脑同时设生理盐水的对照。Ｏ抗原鉴定：用A-F多价Ｏ血清进行玻组织、盲肠内容物等病料，无菌操作取待检

6、病料接种分别接种麦板凝集试验，同时，设生理盐水作为对照，阳性凝集者依次用康凯琼脂平板、SS琼脂平板和营养琼脂平板，37℃培养24～48Ｏ4、Ｏ9、Ｏ7、Ｏ8、Ｏ10、Ｏ2和Ｏ11因子血清进行凝集试验。根h，结果，从死亡鸡的组织脏器中分离到1株疑似细菌。该分离菌据试验结果，判定分离菌O抗原型。H抗原鉴定：取疑似菌依次用在麦康凯平板上生长出无色、透明菌落，在SS平板上生长出无色H多价血清进行鉴定，对于阳性者，再用对应的H复合血清及H单透明菌落，部分菌落中心有黑点，在营养琼脂上生长出无色透明因子血清逐一检

7、查，以确定H第一相及第二相H抗原。H抗原成分[4]菌落，初步判断为沙门氏菌。的最后确定均应根据H单因子血清的检查结果。2.2　显微镜观察结果表明，分离菌与沙门氏菌Ｏ4因子血清发生凝集反应，与将可疑沙门氏菌单菌落经涂片固定后，置高倍显微镜下观其他Ｏ因子血清不凝集，可以判定该分离菌株属于沙门氏菌B群。察，显示分离菌为长短不一、两端钝圆、两极着色、呈直线形的进一步对H抗原的检测结果表明，分离菌分别与Hi和H1、2发生凝革兰氏阴性细小杆菌，取单菌落接种到LB液体培养基中，37℃培集反应。查阅卡夫曼-怀特沙门

8、菌抗原表，判定该分离菌为鼠伤寒养12～20h培养后保存备用。沙门菌。2.3　生化试验2.6　药敏试验取分离菌的24h纯培养物分别进行糖发酵试验（葡萄糖、乳挑取纯化好的菌落加入少量灭菌生理盐水中制成浓菌液，以糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖）、甲基红试验、枸橼酸盐利用试验麦氏比浊管为对照调整菌液浓度为0.5个单位，将上述菌液均匀涂与硫化氢试验等，结果表明分离菌株能分解葡萄糖、甘露醇、麦布在MH琼脂平板上，分别贴上各种药敏纸片，37℃培养22～24h芽糖，产酸产气，不利用乳糖和蔗