鸡沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验.pdf

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1、广西畜牧兽医2011年Vo1．27(4)213鸡沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验黄世娟，陈进喜’，彭定兵“，翟成兵，郑彦梓(1．广西钦州市动物疫病预防控制中心，钦州535000；2．广西钦州市动物产品质量安全检测中心．，钦州535000)中图分类号：$855．123．1文献标识码：B文章编号：1002—5235(2011)04—0213—03鸡沙门氏菌病(AvianSalmonellosis)是鸡的常板、伊红美蓝营养琼脂平板上，37qc恒温培养24h。见细菌性传染病，由多种沙门氏菌引起的一类传染观察细菌生长情况及菌落特征，挑选可疑的单个菌病的总称。引

2、起禽类发病的沙门氏菌主要有鸡白落划线接种于营养琼脂培养基上，37c【=恒温培养痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌及有鞭毛能运动的多24h。然后将单个菌落抹片，进行革兰氏染色、显种副伤寒沙门氏菌-】J。沙门氏菌病导致鸡的生产微镜观察。性能下降，种蛋的孵化率降低，对养鸡业造成巨大1．5生化试验的经济损失。由于抗菌药物的滥用及不合理使用，挑取以上麦康凯琼脂平板培养基上无色小菌使沙门氏菌普遍产生耐药性，且耐药谱也越来越落，作革兰氏染色，选择革兰氏阴性菌落3个，分别广’。本试验对临床症状、病理剖检变化疑似沙斜面上画线，于37~C培养24h。用接种针挑取纯培门氏菌的

3、病料进行了实验室诊断，对沙门氏菌进行养物接种于包括葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、麦芽分离培养、生化及PCR试验，药敏试验，为指导养糖、阿拉伯糖、肌醇、鼠李糖、H。S和木糖等生化试鸡户合理用药，控制和治疗沙门氏菌病提供依据。验管，各接种3管，37c《=培养24h，观察反应情况。1．6PCR扩增1材料与方法根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计引1．1备检材料物]，由上海生工生物工程公司合成。扩增产物发病死亡疑似沙门氏菌病的2份雏鸡病料。长度为202bp，引物如下：invA—up：5’一CGGT—1．2主要试剂GGGGTlq'GTYGTCq3Trc一3

4、’．invA—dn：5’一麦康凯琼脂培养基，ss营养琼脂培养基，伊红TCTCT／q'CCAGTI'CGCTI'CGCC一3’。美兰营养琼脂培养基，氯化镁孔雀绿增菌液(MM)参照TIANamp病毒基因组DNA／RNA提取试等培养基按常规方法配制；微量生化发酵管由上海剂盒方法提取核酸，用上述引物进行PCR鉴定，反医学化验所试剂厂生产；试验药物纸片购自北京天应体系总体积25L：内含模板2．0ILL，加2×Taq坛药物生物技术开发公司；TIANamp病毒基因组PCRMasterMix12．5IxL，上下游引物(25pmol／lxL)DNA／RNA提取试剂

5、盒为天根生物公司产品。各0．5IxL，加ddH20至25L，置PCR仪中，95~C51．3发病鸡群情况min；94c【=变性45s，54℃退火45s，72c【=延伸60某散养户购人1000只三黄雏鸡，未接种任何s，35个循环；72cC延伸10min。取PCR产物7疫苗。8日龄时出现精神不振、食欲减退，9日龄时在lOg／L琼脂糖凝胶上电泳，置凝胶成像系统中开始有部分鸡死亡。病鸡肛门周围粘附白色粪便，观察结果。腹部膨大，剖检有败血性变化，肝脏肿大，有点状出1．7药敏试验血或灰白色坏死点，肾脏肿大、泄殖腔内有白色尿无菌挑取分离培养的细菌涂布于营养培养基

6、，酸盐，胆囊充盈，有的脾脏肿大，质地脆弱。待稍干后，将各种抗生素药敏纸片平贴于培养基表1．4细菌分离与培养面，放入培养箱中37~C培养24h后，观察、测定抑剖检病死鸡，取肝、脾、肠腔内容物无菌接种到菌圈的直径。判定标准J：抑菌圈直径在15mm以MM营养肉汤中，于37℃增菌培养24h。取增菌液分别接种于麦康凯营养琼脂平板、SS营养琼脂平上为高度敏感(青霉素高敏为20mm以上)；10～15mm为中度敏感；10ram以下为低度敏感，无抑{通讯作者，E—mail：qz2108898@163．corn。菌圈为不敏感。214广西畜牧兽医2011年Vo1．27

7、(4)取单个菌落涂片、革兰氏染色、镜检，视野中发2结果现大量红色、两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌，单2．1分离培养结果个、成对或成丛分布，形态均一，无芽胞，无荚膜。病料采集经培养基24h培养后，在ss琼脂平2．3生化试验结果板培养基上可观察到无色半透明菌落，部分菌落中将营养培养基平皿上的单个沙门氏菌菌落分间带黑色。在麦康凯培养基上观察到菌落呈透明、别接种于生化培养基中，37℃培养24h。生化试验无色、圆形凸起、湿润，直径为1mm一2mm。结果符合沙门氏菌的特性(见表1)，从而证明分2．2染色及形态观察离菌均为沙门氏菌，命名为sl，S2。表1生化特性

8、试验结果注：“+”表示产酸或阳性；“o”表示产气；“一”表示阴性。2．4PCR鉴定结果2．5药敏试验结果用PCR扩增得到一条长约202b