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《逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区gap-43和nogo-amrna基因表达的调节作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区GAP-43和Nogo-AmRNA基因表达的调节作用郝艳坤1王乐秋2袁辉1何志鹏1（1.牡丹江医学院机能学教研室；2.牡丹江医学院红旗医院住院处耳鼻咽喉科牡丹江157000）【屮图分类号】R285.5A1008-6455（2010）10-0132-02现在，随着社会竞争的加剧，抑郁症的患病率呈逐年上升的趋势。近十几年研究发现，社会应激因素，包括重火的灾难性的生活事件、生活屮的烦扰及长期的困扰，与认知心理因素相互作用，对抑郁症的发生发展有很大的影响，慢性、低强度、长期的应激源是促进抑郁发生
2、、加速抑郁症发展的主要原因。海马包括齿状回、K托和灰质，是介导应激反应的最重要的脑区之一。慢性应激、海马损害与抑郁症关系密切［1】，慢性长期应激可导致海马的神经细胞的变性和丢失;细胞蒌缩、轴突末梢结构改变;细胞再生减少以及突触可塑性降低和囊泡重排。这些原因可能影响突触可塑性的变化，从而引起临床的抑郁表现。本实验用RT-PCR的方法研究慢性束缚应激情况下，GAP-43和NogoAmRNA棊因表达在海马和杏仁核的变化，以及逍遥散的影响，以进一步解释慢性束缚应激对突触可塑性的变化机制。1材料与方法1.1动物与分组:实验用II
3、级雄性（SD）大鼠36只,体重（200±20克）g。购&北京维通利华实验动物研究屮心。合格证号码:SCXK-京2002-0003、适应性饲养3天后随机分为7天正常对照组（A组，n=6）,21天正常对照组（B组，n=6）,7天模型组（C组，n=6）,21天模型组（D组，n=6）,7天治疗组（E组，n=6）,21天治疗组（F组，n=6>6组动物每笼6只群养，饲养于普通级动物房，室内温度保持为（22&plUsmn;2fC，相对湿度保持为22%,各组大鼠喂常规饲料，自由进食饮水。1.2药物：实验所用的屮药复方选用
4、《太平惠民和剂局方》屮的逍遥散（柴胡30g,当归30g,自芍30g,白术30g,茯苓30g，炙甘草15g，生姜10g,薄荷10g)，中药饮片均购自北京同仁堂药店，由中日友好医院制剂室煎煮、浓缩制成药粉备用，用吋根据需要用蒸馏水配制成-定的浓度。1.3试剂与仪器：Trizol为Gibcol公司产品，SuperScriptTMIIIRT为Invitrogen产品，dNTPMix、RandomPrimers、Rnasein为Promega产品，DNAMark、2×TaqPCRMixture购自天根生化科技有限公司
5、;PCR仪为MJResearch公司的MiniCyclerPTC—150型扩增仪。1.4模型制备及药物干预：以慢性束缚方法［2】制作应激大鼠模型，将大鼠束缚于特制的束缚架上，每日3h,C组、E组为7天，D、F组连续进行21天，A、B组每天拿出放置于各自的饲养箱中3h。自造模第I天开始，A、B、C、D组每日灌服蒸馏水，E、F组在束缚前lh灌服逍遥散，按人体用药量换算成大鼠等效剂量作为大鼠用药量，给药量为5.82g/kg，灌胃容积为lml/100g体重。1.5取材：分别于7天、21天造模结束后的第2天，用2%戊巴比妥钠腹腔
6、注射进行深度麻醉(40mg/kg),迅速断头，在超净台内冰上取脑，分别剥离出海马和杏仁核，按照文［3】方法，再将海马分离为CA1区、CA3区、DG,分别放人1.5mL灭菌的离心管中，埋入干冰粉末中迅速冷冻，-70°C冰箱保存备用。1.6大鼠海马总RNA的提取和含量的测定：将盛奋脑组织(约18-22mg)的离心管中各加700uLTrizol,用手持电动匀浆器匀浆(间断，每隔10s,匀浆10s)，室温放置5min后，离心10min(4°C,12000g);吸取上清，加人0.2ml的氯仿，振荡15s,在室温下孵育5—lOmi
7、n后离心15min(4°C,12000g),吸取清水相，然后进行RNA沉淀、冲洗、溶解。用分光光度计测定RNA的浓度和纯度，A260/A280比值低于1.5者弃去。1.7逆转录反应：釆用20uL反应体系，取2ug总RNA，加人500ug/mL随机引物0.4uL，Ommol/LdNTPMixluL,加人ddH20使总体积达到13.9uL,混合后65°C孵育5min,迅速转至冰上至少Imin，加入5倍First-Strandbuffer4uL,O.lmol/LDTTluL、RNasein0.5uL、SuperscriptI
8、IIRT0.6uL,充分混合后25°C孵育5min,50°C孵育60min,70°C放置15min,中止反应。1.8PCR引物设计:引物根据Genebank的序列和参考文［4-5］设计，由上海吉康生物技术有限公司合成，引物序列如下:GAP-43(forward:5’-GGAGCCTAAACAAGCCGATGT-3&rs
