大鼠束缚浸水应激不同时间段不同脑区cFos表达的比较研究

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1、山东师范大学博士学位论文大鼠束缚一浸水应激不同时间段不同脑区c—Fos表达的比较研究中文摘要大鼠束缚．浸水应激(restmintwater．岫mersionstress，RWIS)，作为一种心理和躯体的复合应激模型，能在几小时内产生迷走神经介导的胃运动机能亢进、胃酸分泌增多和急性胃粘膜损伤等现象。此模型已被广泛用来研究应激性胃粘膜损伤的发生机制及其临床治疗药物的筛选等。众多研究表明束缚．浸水应激状态下胃机能紊乱主要是由于脑中神经元的活动异常导致的，而且是通过迷走副交感传出纤维介导的。支配胃的迷走副交感神经纤维主要来自延髓的迷走神经背核，部分来自疑核。此

2、外，延髓孤束核接受来自胃的部分传入信息。延髓最后区是呕吐反射的化学感受触发区，也接受胃的迷走感觉纤维传入。迷走神经背核、孤束核和最后区位置邻近，神经元的相互联系复杂，功能上关系密切，构成迷走复合体。迷走复合体和疑核是调控胃机能的初级中枢。然而电刺激／化学刺激(L．谷氨酸)迷走复合体和疑核均抑制麻醉状态大鼠的胃运动。因此，RWIS状态下，调控胃机能的初级中枢——迷走复合体和疑核神经元是否被兴奋及其活动的时．空模式成为研究的重点和需要解决的首要问题。边缘前脑是调控内脏机能的高位脑中枢，关于大鼠RWIS诱导边缘前脑神经元活动的研究仅局限于中间前额叶皮层(mP

3、FC)和下丘脑室旁核(PvN)，且未系统研究RwIS过程中边缘前脑不同核团中神经元的活动模式。传统观念认为应激反应的中枢效应主要发生在下丘脑．垂体．肾上腺皮质(HPA)轴，而众多研究表明RWIS主要诱导副交感神经系统的活动加强。I州IS状态下，整个HPA轴的活动是否加强需要进行探讨。因此，本文拟用即刻早期基因纠铅表达产物c．Fos蛋白作为神经元活动的标志，研究束缚．浸水应激不同时间段诱导的大鼠不同脑区内神经元的时空活动模式，从而探讨束缚．浸水应激致胃机能紊乱的中枢神经机制，为临床探讨从中枢方面防治应激性胃粘膜损伤、改善胃肠动力的新对策提供重要依据。根据

4、束缚一浸水应激时间将雄性Wistar大鼠随机分为5组，分别为应激O血n(即对照组)和应激30、60、120和180miIl。此外，为探讨c．Fos表达的内在动力学特征，额外设立一组，大鼠应激30min再恢复30mjn(研oup30．30)，分别与应激30商n和应激60枷n的大鼠进行比较。应激完毕后，过量戊巴比妥钠腹腔注射麻醉动物，测量体温，取胃，甲醛固定统计胃粘膜损伤指数。取胃后，快速心脏灌流固定脑组织及垂体和肾上腺，并进行山东师范大学博士学位论文后固定、脱水处理，然后进行冰冻切片。漂浮切片进行c．Fos蛋白免疫组化显色。c-Fos表达的强弱以单位面积

5、(O．0l砌【n2)内Fos免疫反应阳性神经元(Fos．承neurons)的个数与累积光密度来表示。此外，由于不同核团c．Fos表达的基础水平不同，本研究还采用“对照组的倍数”(multiplesofcomr01s)作为这些核团的c．Fos表达的相对强度，即每只大鼠c．Fos表达的量除以对照组c．Fos表达的平均值，统计得“对照组的倍数”。大鼠束缚．浸水应激不同时间段显著影响迷走复合体和疑核中c．Fos蛋白的表达。迷走复合体和疑核都是在应激60n曲时c．Fos表达最强，以后随应激时间延长，表达逐渐减弱。值得注意的是，束缚．浸水应激过程中，迷走神经背核的

6、c．Fos表达最强，其次是疑核、孤束核和最后区。迷走神经背核尾段c．Fos表达的高峰出现在应激120觚n时，迟于迷走神经背核吻段和中段(60衄n)，且尾段c．Fos的高峰表达显著强于同一时间段吻段和中段的c．Fos表达。孤束核中段和尾段的c．Fos表达始终显著强于吻段。这些结果表明，调控胃机能的初级中枢——迷走复合体(尤其是迷走神经背核)和疑核神经元的过度活动可能在束缚．浸水应激致胃机能紊乱中起重要的调控作用，且迷走神经背核和孤束核不同区域的调控作用有所差异。大鼠束缚一浸水应激不同时间段显著影响边缘前脑不同区域c．Fos蛋白的表达。中线皮层区c—Fos

7、表达在应激60lIlin时达到高峰，随后逐渐降低。隔区和杏仁核的c．Fos表达倾向于在应激120min时达到高峰。下丘脑大部分核团尤其是视上核(SON)和PVN中c—Fos表达在应激30血n时显著增强，然后维持在相对高的水平。然而，非常值得探究的发现是，束缚．浸水应激过程中，下丘脑SON的c．Fos表达总是最强，其次是下丘脑PvN、皮质后杏仁核(PCoA)、中央杏仁核(CeA)和n1PFC。此外，胃粘膜损伤随着束缚．浸水应激时间的延长逐渐加重，而大鼠体温在应激60嘶n后降低到最低水平。上述核团神经元活动的增强可能与调控机体对RWIS的反应和RWIS诱导

8、的体温降低及胃机能紊乱有关。大鼠束缚．浸水应激诱导HPA轴c．Fos蛋白的表达情况比较复杂，3