电喷雾质谱结合化学计量学方法快速筛选玛咖促睾丸间质细胞增殖活性成分

《电喷雾质谱结合化学计量学方法快速筛选玛咖促睾丸间质细胞增殖活性成分》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、电喷雾质谱结合化学计量学方法快速筛选玛咖促睾丸间质细胞增殖活性成分　　摘要应用电喷雾串联质谱法（ESIMS/MS）对云南和秘鲁产玛咖样品中低极性化学成分进行检测，获得各样品的一级质谱指纹谱图和各离子峰的二级质谱数据，并测定各样品促进大鼠睾丸间质细胞增殖活性，采用化学计量学方法主成分分析（PCA）、偏最小二乘法（PLS）和灰色关联度分析（GRA）对所获得的一级质谱数据进行处理后，可有效区分玛咖的不同产地，且筛选出其中具有促大鼠睾丸间质细胞增殖活性的可能成分，进而通过二级质谱数据分析得到可能活性成分的结构。实验结果表明，玛咖低极性成分具有很好的促大

2、鼠睾丸间质细胞增殖活性，其中活性较强的主要为Nbenzylhexadecanamide和Nbenzy（9Z，12Z，15Z）octadecatrienamide。本方法为简单、快速分析中药中促睾丸间质细胞增殖活性成分筛选方法提供了借鉴关键词玛咖；不同产地；电喷雾串联质谱；化学计量学方法；促睾丸间质细胞增殖1引言17玛咖（Lepidiummeyenii）为十字花科Brassicaceae独行菜属Lepidium植物，原产于南美洲安第斯山区[1]。玛咖含有丰富的营养成分和具有多种生物活性的次级代谢产物，其中低极性玛咖酰胺被认为是其特有的标志性成分[

3、2～4]。玛咖具有多方面的药理作用，包括提高生育力和性功能、抗疲劳、抗氧化、缓解更年期综合症、抗衰老和抗肿瘤等作用[3～5]，在保健品和药用方面具有广阔的开发前景[6]近年来对玛咖中成分的分析方法主要有酸性染料比色法、薄层色谱法（TLC）、气相色谱质谱联用法（GCMS）、高效液相色谱法（HPLC）和高效液相色谱电喷雾串联质谱法（HPLCESIMS/MS）[7～12＼]。而对于玛咖的玛咖酰胺类成分的研究主要集中在使用酸性染料比色法检测总生物碱含量[9＼]，以及使用高效液相色谱结合标准品对主要玛咖酰胺类化合物的定性与定量研究上[13＼]。电喷雾电离

4、串联质谱技术作为一种软电离技术，已成为研究天然产物结构的重要手段。直接进样电喷雾串联质谱法只需要很少的样品量，并且不需要对被分析物进行分离处理，节省了分析步骤，提高了检测效率[14＼]。如能将其与化学计量学方法结合应用[15＼]，就可将被分析中药等复杂体系中化学成分组成及结构与其对应活性相关联，从而达到快速筛选活性成分的目的17本研究利用直接进样电喷雾串联质谱法对玛咖低极性化学成分进行分析，结合化学计量学对所获得的电喷雾质谱指纹图谱及不同产地玛咖样品促睾丸间质细胞增殖活性数据进行处理。结果用于对来源于不同产地的玛咖进行有效区分，并快速筛选分析玛

5、咖中具有促大鼠睾丸间质细胞增殖活性的可能成分和结构，为深入研究玛咖中促睾丸间质细胞增殖活性成分提供分析方法基础2实验部分2.1仪器与试剂质谱分析采用6320iontrap电喷雾离子阱质谱（美国Agilent公司）；KQ3200BE超声波清洗器（中国昆山市超声仪有限公司）；Model680型酶标仪（日本TAKARA公司）；TGL16B台式离心机（中国上海安亭科学仪器有限公司）；BP211D型十万分之一电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）玛咖经长春中医药大学张辉教授鉴定为十字花科独行菜属植物玛咖（Lepidiummeyenii）的干燥根及根茎。不同

6、批号的云南产玛咖（Y01Y04）和秘鲁产玛咖（M01M06）购于长春北京同仁堂药店；乙腈、甲醇和甲酸（色谱纯，美国Fisher公司）；水为超纯水（美国MilliQ纯水仪）；四甲基偶氮唑盐（MTT，美国Amresco公司）；DMEM（美国Gibco公司）2.2样品制备取玛咖干燥根及根茎适量粉碎为20目粗粉，称取粉末1.0g，加入无水乙醚10mL，在50℃以下超声提取60min，过滤，滤液40℃减压回收溶剂至干，残渣用乙腈溶解并定容至1mL，用0.22μm滤膜过滤，滤液用于电喷雾质谱分析17另称取粉末1.0g，按上法制备得到乙醚提取物，溶于适量含有

7、0.5%DMSO的DMEM溶液，配制成100μg/mL玛咖乙醚提取物样品溶液，用于睾丸间质细胞增殖实验2.3质谱条件质量范围m/z300～500，实验前质量数经过校正；目标分子量400；实验中采用正离子模式。样品通过流动注射泵进样，流速5μL/min；干燥气温度：350℃；干燥气流量：9mL/min；雾化气压强：0.24MPa（35.0psi）；毛细管电压：3.5kV2.4睾丸间质细胞的分离培养取3只SD雄性成年大鼠（吉林大学动物中心提供〔动物合格证号：SCXK（吉）20130005〕），体重250～300g。大鼠断颈处死，剖开腹腔剥离取出睾丸

8、，放入TypeI胶原酶中，37℃恒温振荡器中振荡消化15min，用3倍体积DMEM稀释终止消化。过滤、离心后制成悬浮液，吸出后接种于培养瓶中，放于37