快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究

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1、快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究作者：贝伟剑，郭姣，胡因铭，黄利华，胡旭光，曹扬【摘要】目的研究快速筛选调节肝脂酶活性中药成分的方法。方法利用大鼠肝组织匀浆和比色法检测肝脂酶(HL)活性，观察不同实验条件及中药成分对HL活性的影响。结果正常大鼠肝组织匀浆具有明显的HL酶促动力学特性，其HL脂解活性有明显Ca2+依赖性，受钙调蛋白拮抗剂盐酸异丙嗪抑制，符合纯化HL的酶促动力学特性;筛选得到齐墩果酸和人参皂苷Rb22个增强肝脂酶活性成分。结论首次用大鼠肝组织匀浆和脂酶比色测定法建立了一种简便易行、快捷的调节肝脂酶活性中药有效成分

2、筛选方法，可用于影响肝脂酶活性的中药调脂活性成分的筛选，并从有效方药组分中筛选得到有增强HL活性的组分。【关键词】肝脂酶;快速筛选;大鼠肝匀浆;复方贞术调脂方;肝脂酶激活剂Abstract:ObjectiveTostudytheneChinesemedicineregulatinghepaticlipaseactivities.MethodsRatliverhomogenateandcolorimetricassayofhepaticlipase(HL)activitiesedicineonhepaticlipaseactiviti

3、es.ResultItogenateofSDratsdemonstratedsignificantenzymekiicpropertiesofHL.Itslipolyticactivitiesodulinantagonistpromethazinehydrochloride,consistentatickiicpropertiesofpurifiedHLreportedintheliterature.OleanolicacidandginsenosidesRb2ethodforrapidscreeningoftheactiveing

4、redientofChinesemedicineregulatingHLactivitiesbyusingratliverhomogenateinbinationetricassayofHLactivitiespleandreliable,andcouldbeusedin.rapidscreeningoflipidloedicinehavingeffectsonHLactivities,andscreeningofactiveingredientsthatmightincreaseHLactivitiesfromeffective

5、recipesoftraditionalChinesemedicine.　　Keyogenate;FufangZhenzhuTiaozhiFang(FTZ)recipe;hepaticlipasactivator　肝脂酶(hepaticlipase,HL)是重要的脂代谢酶，其合成、分布、活性的变化和高脂血症、脂肪肝、动脉粥样硬化等密切相关。肝组织和血浆中HL酶活性的降低，可引起高脂血症[1-3]，并在脂肪肝发病中起重要作用[4，5]。　　复方贞术调脂方(简称FTZ)由女贞子、丹参、三七、黄连等中药组成，含有齐墩果酸、三七皂苷、黄连素

6、、丹参素等活性成分，在临床应用和实验研究中发现该方不仅具有明显的降低总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)及升高高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的作用,并能升高血浆HL活性、抑制动脉粥样硬化(AS)形成、抑制脂肪肝形成等作用[6，7]，还能使饮食性高脂血症模型大鼠降低的肝组织和血浆中HL的活性恢复至正常水平[7]。　　为了研究中药降血脂的物质基础和筛选新药，本研究以HL为靶点，以FTZ组分为调节HL活性成分的筛选对象，研究建立一种采用大鼠肝匀浆比色法测定肝脂酶活性，快速筛选调节HL活性中药有效成分的方法

7、，现报道如下。　　1材料与仪器　　1.1材料与试剂　　FTZ提取物称取FTZ处方药材(由女贞子、丹参、三七、黄连等按2∶1∶0.5∶0.5质量比组成)，置圆底烧瓶中，加70%(φ)乙醇8倍量，浸泡0.5h，加热回流提取1.5h，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，浓缩液备用;药渣加水8倍量，加热回流提取1.5h，滤过，浓缩，合并浓缩至3g生药/g浸膏,临用时用0.1mmol/LTrisCl缓冲液溶解稀释至相应浓度。　　三七总皂苷、人参皂苷Rb2、齐墩果酸、盐酸小檗碱、丹参素由中国药品生物制品检定所提供;总脂酶试剂盒(南京建成生物工程研究

8、所);大鼠肝脂酶的ELISA测定试剂盒(武汉中美科技);磷酸盐等试剂均为国产分析纯试剂;　　盐酸氯丙嗪(Sigma公司);十二烷基硫酸钠(SDS)、二硫代苏糖醇(DTT)(Amresco)。　　1.2实验动物　　SpagueDaol/