百合多糖对小鼠免疫功能的影响

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1、百合多糖对小鼠免疫功能的影响【关键词】百合多糖类免疫/药物作用0引言多糖是自然界中含量丰富的生物聚合物,它是由醛糖或酮糖通过糖苷键连接在一起,是构成生命的四大基本物质之一，多糖类具有多种显著的生物活性和药理作用.近年来，中药材所含植物多糖的免疫调理作用备受关注，已有100余种中药被用于相关研究.但是百合多糖免疫调节作用的研究报道较少.我们从兰州百合中提取水溶性多糖［1］,并观察其对环磷酰胺免疫抑制模型小鼠免疫功能的影响.1材料和方法1.1材料百合多糖（Lilypolysaccharide，LP）由本室从兰州

2、百合中提取，含量为80.4％，用时无菌生理盐水溶解；环磷酰胺(CTX)，上海华联制药有限公司，批号31021703；多抗甲素口服液，西安光华制药厂，批号20041023；刀豆蛋白（ConA），Sigma公司；MTT，Sigma公司；DMSO(AR)，天津化学试剂一厂；小牛血清，杭州四季青生物工程有限公司；RPMI1640细胞培养基，GIBCO公司.ICR封闭群小鼠，清洁动物（生产合格证号：陕医动字08004），18～22g；绵羊红细胞（SRBC）；均由西安交通大学医学院实验动物中心提供.1.2方法1.2.

3、1百合多糖对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响ICR小鼠60只，随机分为6组，即正常对照组、CTX模型对照组、LP小剂量组（0.1g/kg）、LP中剂量组（0.2g/kg）、LP大剂量组（0.4g/kg）和阳性药多抗甲素对照组(0.0125g/kg)，每组10只，雌雄各半.小鼠免疫抑制模型按文献［2］方法复制，除正常对照组外，其他各组小鼠右侧前肢腋窝皮下注射4g/L环磷酰胺溶液（25mg/kg，无菌生理盐水配制），每隔48h注射1次.各组小鼠于给药第2，5日分别腹腔注射50g/L无菌可溶性淀粉溶液(25mL/kg).

4、百合多糖实验组每日用不同剂量的LP灌胃1次（25mL/g），药物阳性对照组每日用多抗甲素灌胃1次(25mL/g)，正常对照组每日用生理盐水灌胃1次（25mL/g）,共7d.在末次给药后，所有小鼠腹腔注射无菌普通肉汤50mL/kg，用注射器吸取腹腔液0.1mL于洁净载物玻片，加0.1mL（0.1mL/L）鸡红细胞悬液，充分混匀；置于湿盒内37℃孵育30min.用生理盐水漂洗3次，室温干燥.按文献［3］方法计算吞噬百分率和吞噬指数.1.2.2免疫器官质量的测定上述各组小鼠在吸取腹腔液后断颈处死，用电子天平精确称取

5、小鼠体质量、胸腺质量、脾脏质量.按文献方法计算小鼠的胸腺指数和脾脏指数.1.2.3血清溶血素滴度测定实验小鼠按1.2.1实验分组方法分组并给药，在给药的第2日腹腔注射500mL/L绵羊红细胞悬液0.2mL/只进行免疫.每日给药1次，连续7d，末次给药后1h，小鼠眼球后静脉采血制备血清.按文献［4］方法测定血清溶血素含量（HCIgG，HCIgM）.1.2.4小鼠脾细胞增殖实验［4］按常规方法制成细胞浓度为1×1010个/L脾细胞悬液，混匀后加到96孔培养板中，每孔均加入脾细胞1×106个.淋巴细胞增殖实验分两部

6、分：①加ConA组：每孔均加入不同浓度的LP和终浓度为5mg/L的ConA；②无ConA组：每孔均加入不同浓度的LP.以RPMI1640培养液为阴性对照，终浓度为10mg/L的ConA组为阳性对照；每组均设4个复孔.置37℃，50mL/LCO2培养箱中静止培养68h后，MTT法测A值.2.2LP对小鼠免疫器官发育的影响CTX免疫抑制模型组胸腺指数和脾脏指数比正常对照组低（P<0.01），说明造模成功；LP小、中、大三个剂量组胸腺指数和脾脏指数均高于CTX模型对照组(P<0.01)（表2），但LP

7、各组间无量效关系（P＞0.05）.表1百合多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响表2百合多糠对小鼠免疫器官重量的影响2.3LP对小鼠血清溶血素水平的影响CTX免疫抑制模型组血清溶血素滴度比正常对照组低（P<0.01）；而LP小、中、大三个剂量组血清溶血素水平均高于模型对照组，且随着LP剂量的增加，血清溶血素水平在逐渐提高，呈量效相关性（P<0.05，表3）.表3百合多糖对小鼠血清溶血素水平的影响2.4LP对小鼠脾细胞增殖的影响单纯用LP，两剂量组A值分别为0.216±0.017和0.291±0.130，

8、而LP与ConA合用，其A值分别为0.543±0.060和0.630±0.021，与模型对照组A值0.115±0.012相比均可促进小鼠脾细胞增殖（P<0.05），并且LP与ConA合用使细胞活力增长的作用比单独使用LP及单独使用ConA强（P<0.01）.3讨论百合具有养阴润肺止咳、清心安神、补中益气的功效，是公认的补益之品.百合多糖的研究在近年才逐步开展起来，其药理作用的研究也处于刚