吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用

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1、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用：张利众赵瑞景3刘建坤高书涛朱铁年【摘要】目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用及机制。方法雄性ethodsMale)ratmodelslydividedintodiabeticmodelanddiabeticPDTCtreatedgroups.AftertheratsinedandliversRNAodelgroupalcontrolgroup(P<0.01),andnodifferenceexisted

2、betodelgroup(P>0.05).PDTCsignificantlyreducedlivercellsteatosisanddamageparedodelgroup.TheexpressionofiNOSmRNAodelgroup(P<0.01),andtheexpressionindiabeticPDTCtreatedgroupodelgroup(P<0.01).ConclusionsPDTCcanreducetheexpressionofiNOSmRNAandliversteatosisandinjury.　　【Keyat

3、e;Diabetes;Fattyliver;iNOS　　随着糖尿病患病率的增加，出现糖尿病并发症的患者逐年增多。对于糖尿病并发症人们关注最多的是血管及神经系统病变，而对于糖尿病合并肝脏病变研究较少，有研究表明糖尿病患者中合并肝脏病变高达50%以上〔1〕。本文从氧化损伤角度探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)对糖尿病肝脏病变的治疗作用及机制。　　1材料与方法　　1.1材料链脲佐菌素(STZ)及PDTC，均购自美国SantaCruz公司，PCR试剂盒购自Promega公司。清洁级雄性)模型的建立参照Ree

4、d等〔2〕方法建立T2DM大鼠模型。所有大鼠适应性喂养普通饲料1g/kg一次性腹腔注射，共有23只大鼠成模，后随机分为两组，11只为T2DM模型组，12只为PDTC治疗组。PDTC治疗组给予PDTC腹腔注射治疗(50mg/kg)，1次/d，连续治疗1g/kg)腹腔注射治疗，其他组给生理盐水腹腔注射。断头处死，分别留取标本。　　1.2.2血液指标的测定每组随机选取6只，处死时留取血液，分离血清，用自动化分析仪测定甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、游离脂肪酸(FFA)含量。　　1.2.3肝脏HE染色在肝右叶取肝组织块，用10%

5、中性甲醛固定，常规脱水，石蜡切片，HE染色，在光镜下观察肝脏形态学改变。　　1.2.4RTPCR测定诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平使用Trizol试剂抽提组织中的总RNA，测定浓度，逆转录为cDNA。根据GenBank中大鼠源iNOS，βactin全长设计引物。iNOS5′ACCTGGGGAACACCTGGGGATTTT3′(正义链)，5′GCTGGGTGGGAGGGGTAGTGATGT3′(反义链)。内参照βactin：5′GAAGGTGAAGGTCGGAGTC3′(正义链)，5′GAAGATGGTGATGGGATTT

6、C3′(反义链)。按照PCR反应试剂盒说明书，配制25μlPCR反应液，反应条件：95℃预变性5min，94℃30s，55℃30s，72℃30s，进行30个循环，最后72℃延伸5min。取各目的基因扩增产物8μl，经2%琼脂糖凝胶电泳，iNOS和βactin的PCR产物分别为218bp和220bp，紫外灯下观察并拍照。采用ImageJ图像分析系统进行产物灰度图像分析，以iNOS与βactin的电泳条带光密度值的比值作为相对表达量。　　1.3统计学方法实验数据以x±s表示，使用SPSS13.0统计软件，采用方差齐性检验，组间比较采用单因素方差分析。　　

7、2结果　　2.1各组大鼠生化指标检测模型组大鼠TC、TG、LDLC、FFA水平均明显高于对照组，且差异显著(均P<0.05)，经PDTC治疗后血TC、LDLC、FFA略有下降，但与模型组比较差异无统计学意义(均P>0.05)，但是TG下降明显，且与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。　　2.2肝脏组织HE染色正常组肝小叶结构清晰完整，肝细胞索以中央静脉为中心呈放射状整齐排列，肝细胞核结构清晰，肝细胞形态正常。肝窦正常，连接成网状。糖尿病模型组肝细胞肿大明显，胞浆染色不均，肝细胞内出现大量大小不一脂肪空泡，肝细胞边界不清

8、，细胞排列紊乱，肝索结构消失，肝小叶结构模糊不清。PDTC治疗组肝