bim1基因在胃癌中的表达及其临床意义

《bim1基因在胃癌中的表达及其临床意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、Bim1基因在胃癌中的表达及其临床意义：祁卫东,陈锁成,王胜,许文荣,许晓蒙,孙靖【摘要】目的：探讨Bim1基因在胃腺癌细胞株、胃癌组织和癌旁组织以及胃癌患者外周血中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法:收集80例胃癌患者的癌组织和癌旁组织,培养胃腺癌细胞株(SGC7901,BGC823,AGS),采用RTPCR和实时PCR的方法检测Bmi1基因的表达情况。另外同时收集Bim1基因阳性胃癌患者外周血标本以及健康体检者外周血标本各20例,用淋巴细胞分离液(Ficoll)分离获得单个核细胞,采用巢式PCR和实时PCR的方法检测其Bmi1基因的表达情况。采用蛋白质

2、印迹法验证胃癌组织和对应的癌旁组织以及胃癌患者及健康体检者血单个核细胞中Bim1蛋白的表达情况。结果:胃腺癌细胞株(SGC7901,BGC823,AGS)中Bim1均高表达;胃癌组织中Bim1表达(85%)明显高于癌旁组织(30%)(P<0.05);胃癌患者外周血单个核细胞Bim1基因的阳性率为60%,显著高于健康体检者(P<0.05)。胃癌组织和癌旁组织中Bim1的蛋白水平存在差异,而在外周血中未见明显差异。结论:Bim1基因在胃腺癌细胞株以及胃癌组织中高表达,胃癌患者外周血单个核细胞Bim1的阳性率高于健康体检者,通过检测Bim1基因可为胃癌

3、的临床诊断及其靶向治疗提供新途径。【关键词】Bim1基因;胃癌;RTPCR;实时PCR　　[Abstract]Objective:TodetecttheexpressionofBim1geneingastriccarcinoma,adjacentnoncanceroustissuesandtheperipheralbloodofthecorrespondinggastriccarcinomapatient,toexplorea.Methods:TheexpressionofBim1geneerasechainreaction(RTPCR)andrealtimePC

4、Ringastriccarcinoma,andadjacentnoncanceroustissuesfrom80patientsandthegastriccarcinomacellstrain(SGC7901,BGC823,AGS).Furthermore,etimetheexpressionofBim1geneintheperipheralbloodofboth20correspondinggastriccarcinomapatientsandhealthpeople.UsingrealtimePCRandnestedRTPCRdetectedtheexpress

5、ionofBim1geneintheperipheralblood.EM基础培养基,37℃在5%的CO2培养箱中培养,每3天换液1次,每6～7天传代1次,显微镜下观察细胞生长状况。收集1ml悬浮细胞离心5min(800×g),用PBS冲洗3次。加入1mlTrizol,吹打混匀,室温消化15min,装入1.5ml的不含RNA酶Eppendorff管中,-70℃保存备用。　　1.4组织单个细胞制备　　将100mg胃癌及癌旁组织置于无RNA酶的组织研磨器中的铜网上,加入1ml含0.1%DEPC的PBS,使用一次性塑料研棒将组织研磨成单个细胞,转入1.5ml的不含RNA酶的Eppen

6、dorff管中,1000×g离心5min,弃上清,用1ml含0.1%DEPC的PBS洗两遍,离心,加入1mlTrizol,吹打混匀,室温消化20min,装入1.5ml的不含RNA酶的Eppendorff管中,用作RNA提取;-70℃保存备用。　　1.5总RNA提取　　用Trizol试剂提取胃癌及癌旁组织的总RNA,每份加入200μl冰冷的氯仿,反应10min,4℃12000×g离心10min,吸取上清液至另一1.5ml不含RNA酶的Eppendorff管中,加入600μl冰冷的异丙醇,室温反应10min,4℃12000×g离心10min,弃上清,加入0.1%DEPC水处理过的7

7、5%乙醇洗涤,4℃12000×g离心5min,重复1次,弃上清,将沉淀置无菌超净台中干燥约30min至半透明,加入30μlDEPC处理过的双蒸水,混匀,4℃静置30min,使用核酸蛋白检测仪检测样品浓度。采用逆转录试剂盒以Oligo(dT)为引物合成cDNA第一链,-20℃保存。　　1.6引物设计　　引物参照基因库中提供的Bim1mRNA的完整序列跨外显子设计Bim1mRNA序列和内参基因GAPDHmRNA序列。Bim1基因RTPCR和实时PCR使用Bim1内侧引物,巢式RTPC