edfs40对深低温保存兔颈总动脉结构和舒缩功能的影响

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1、EDFS40对深低温保存兔颈总动脉结构和舒缩功能的影响：蒋安，刘峰，刘昌，宋宇龙，孟珂伟，吕毅蒋安【摘要】目的评价玻璃化溶液EDFS40对深低温保存兔颈总动脉形态结构和舒缩功能的影响。方法无菌条件下取兔颈总动脉，分别以EDFS40和1.5mol/L二甲亚砜为低温保护剂，经玻璃化法和慢速冷冻法深低温保存14d。复温后和新鲜动脉进行大体和显微形态的观察，器官浴槽内进行非内皮依赖性舒缩功能的测定。结果EDFS40组动脉的大体、组织学及超微结构与新鲜动脉相似，对氯化钾的收缩力和慢速冷冻组动脉无明显差别(P>0.05)，对去甲肾上

2、腺素和硝普钠的收缩或舒张张力优于后者(P<0.05)，但均低于新鲜动脉(P<0.05)。结论EDFS40能较好保持兔颈总动脉的形态结构及功能，可用于血管的玻璃化保存。【关键词】深低温保存；兔；颈总动脉；EDFS40；玻璃化　　ABSTRACT:ObjectiveToassesstheeffectofEDFS40onthestructureandvasomotoricityofrabbitcarotidsincryopreservation.MethodsThefreshcarotids,takenfromrabbi

3、tsunderasepticconditions,ethodethylsulfoxide(1.5mol/L).Themorphologicalchangesofbothfreshandthaination,opticalandelectronmicroscopes,respectively.TheirendotheliumindependentvasoconstrictionandvasodilatationorphologicalchangesoftheEDFS40vitrifiedarteriesilartothose

4、ofthefreshcarotidsundermacrography,opticalandelectronmicroscopes.Andthereotoricityofthefresharteries(P<0.05).ConclusionTherabbitcarotidsvitrifiedotorfunctionmaintainedage,ayindicatetheusageofEDFS40invitrificationofbloodvessels.　　KEYSO)、乙二醇(ethyleneglycol,EG)按6∶2∶

5、2的体积配比后，得到EDFS40。②慢速冻存液。含1.5mol/LDMSO、0.2mol/L蔗糖和200mL/L胎牛血清的RPMI1640。　　1.3血管的深低温保存　　①玻璃化法。EDFS40组血管依次经1.5mol/LEG(室温)、EDFS20(4℃)、EDFS30(4℃)、EDFS40(4℃)溶液分别平衡10、10、5、5min后，放入含有EDFS40的冻存管中，一段血管装入一个冻存管，直接投入-196℃液氮中保存2周。使用前将血管取出，37℃水浴复温，再依次经0.5、0.25、0.125mol/L蔗糖溶液进行EDFS

6、40的洗脱。②慢速冷冻法。血管经0.75mol/LDMSO(4℃)平衡20min后，放入含有慢速冻存液的冻存管中，一段血管装入一个冻存管。经4℃、-20℃、-80℃梯度降温，平衡60min，投入-196℃液氮中保存2周。使用前取出，37℃水浴复温，以含100mL/L胎牛血清的RPMI1640洗脱慢速冻存液。　　1.4形态学的观察　　①观察动脉的大体形态、色泽、弹性、韧性和完整程度；②苏木精伊红染色，光镜下观察动脉壁3层结构；③透射电镜观察动脉壁内各种成分(内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞)的超微结构。　　1.5血管收缩舒张

7、功能的测定　　从动脉中段截取长度为1mm的动脉环，悬挂于器官浴槽中，并通过张力换能器连接于生理多导仪上，PoL/LO2和50mL/LCO2的混合气体，保持pH在7.4左右，温度恒定于37℃，给予4mN静息负荷稳定60min，期间每15min换Na+Krebs液一次。依次选用60mmol/L氯化钾(potassiumchloride,KCl)、10-6mol/L去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和10-5mol/L硝普钠(sodiumnitroprusside,SNP)进行动脉环收缩或舒张张力的测定。为区别于收

8、缩力，舒张力测得值以负值表示。　　1.6统计学分析　　采用SPSS13.0统计分析软件进行数据处理。实验数据以±s表示，行单因素(onewayANOVA)方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1光镜下各组兔颈总动脉的组织形态学观察　　EDFS4