大鼠胸主动脉球囊损伤后早期平滑肌细胞凋亡观察

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1、大鼠胸主动脉球囊损伤后早期平滑肌细胞凋亡观察【摘要】目的探讨大鼠胸主动脉球囊损伤后早期细胞凋亡和凋亡相关基因表达的变化及其规律。方法将36只雄性SD大鼠随机分为两组，手术组(n=30)行球囊扩张损伤大鼠胸主动脉术；对照组(n=6)不行球囊损伤。取正常及损伤术后即刻、30min、1h、2h、4h胸主动脉，应用苏木精伊红染色、TUNEL法、免疫组化和计算机图像分析等方法进行形态学观察，进行细胞凋亡、凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl2表达水平检测。结果正常大鼠胸主动脉管腔面有单层完整内皮细胞，内外弹力层呈波浪形，完整连续；手

2、术组球囊损伤后可见内弹力层模糊，多处断裂，管腔面毛糙无内皮细胞；损伤后4h中膜平滑肌细胞密度较对照组减少。对照组、手术组损伤后即刻胸主动脉偶见凋亡细胞；手术组球囊损伤后30min，管壁中膜可见大量凋亡平滑肌细胞，损伤后1、2h中膜凋亡细胞明显减少，损伤后4h中膜仅偶见凋亡细胞。对照组、手术组动脉损伤后即刻胸主动脉偶见Fas阳性平滑肌细胞，球囊损伤后30min中膜可见大量Fas阳性细胞，损伤后1、2h中膜Fas阳性细胞明显减少，动脉损伤后4h仅偶见Fas阳性平滑肌细胞。对照组动脉壁显著表达Bcl2，手术组胸主动脉中膜Bcl

3、2表达迅速下降，损伤后1h达最低水平，后回升。Bcl2与Fas表达呈负相关(r=-0.816，P<0.01)。结论平滑肌细胞凋亡可能在动脉损伤后平滑肌细胞过度增殖和迁移过程中具有重要作用。【关键词】肌细胞平滑肌血管凋亡FasBcl2球囊损伤大鼠［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheearlychangesofapoptosisandtheexpressionofFas/Bcl2inrataortaafterballoonlydividedintotdenudationintho

4、racicaortaandeofballooninjuryand0.5,1,2,and4hourslater.UsingTUNELlabeling,immunohistochemistry,andputerizedimageanalysistoobservetheaortaforsmoothmusclecellapoptosis,theexpressionofFas/Bcl2andthemorphology.ResultsThesurfaceofvessellumenofnormalrataortahadamonolay

5、erofintegratedendothelialcells.Theinternalelasticlaminaoothmusclecellsmediatelyafterinjury.Remarkablemedialvascularsmoothmusclecellsappearedapoptoticat30min,andthensignificantlyreducedat1or2hours,andalratarteries,Bcl2ediareachedtheloarkablynegativecorrelation(r=-

6、0.816,P<0.01).ConclusionThechangesofapoptosisofsmoothmusclecellsprobablyplayanimportantroleintheprocessofexcessiveproliferationandtransferofthemusclecellsafterarteryinjury.［KEYC）的过度增殖和迁移在新生内膜过度增生、血管重塑和再狭窄的病理过程中起关键作用。人们围绕平滑肌细胞增殖做了大量基础及临床研究，但再狭窄仍然是困扰心血管介入医生的一大难题[

7、1]。血管平滑肌的凋亡在许多心血管疾病中具有重要意义[2]，但动脉损伤后细胞凋亡的变化规律及其在再狭窄过程中的意义有待进一步阐明。本实验旨在研究大鼠胸主动脉球囊损伤后早期细胞凋亡规律，为再狭窄的防治提供可能的途径和理论依据。1资料与方法1.1动物分组及处理选用体质量400～500g的雄性SD大鼠36只(购于北京医科大学动物中心)，随机分为两组。对照组(n=6)不行球囊损伤，作为正常对照。手术组(n=30)行球囊损伤胸主动脉术，按术后处死时间又分为术后即刻、30min、1h、2h、4h等不同亚组，每组6只。1.2大鼠胸主动脉

8、球囊损伤模型及标本制作手术组参照文献[3]建立方法用戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，经左侧颈总动脉插入2F球囊导管，仔细操作导管越过主动脉弓进入胸腹主动脉远端（即肾动脉分叉处），注入生理盐水0.15～0.20mL回拉至主动脉弓颈总动脉开口处，重复6次并旋转方向以充分剥脱内皮,损伤胸主动脉，