尖锐湿疣患者外周血t淋巴细胞亚群与局部细胞 免疫功能的相关性研究

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1、尖锐湿疣患者外周血T淋巴细胞亚群与局部细胞免疫功能的相关性研究【关键词】尖锐湿疣；T细胞亚群；流式细胞仪；免疫组织化学［摘要］目的研究尖锐湿疣（condylomaacuminatum,CA）患者外周血T细胞亚群（CD4+、CD8+）及皮损局部T细胞亚群（CD4+、CD8+）的变化及二者的相关性。方法应用流式细胞仪检测42例CA患者及30例正常对照者外周血T细胞亚群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）的百分比；同时用免疫组织化学S-P法对尖锐湿疣患者皮损的表、真皮T细胞亚群进行测定。结果CA组外周血CD4+T细胞表达率（25.21±5.

2、77）%明显低于正常对照组（35.05±3.06）%，CD8+T细胞表达率（39.34±7.46）%，显著高于正常对照组（26.39±2.32）%，二者均具有非常显著性差异（P＜0.01），CD4+/CD8+比值患者组（0.67±0.26）显著低于正常对照组（1.35±0.19）（P＜0.01）；且CA组真皮每高倍视野中CD4+T细胞表达（185.39±31.69）明显高于正常对照组CD4+T细胞（60.64±9.11）（P＜0.01），CA组CD8+T细胞表达（228.86±33.26）显著高于正常对照组（35.59±6.17）（P＜0.

3、01），CA组CD4+/CD8+的比值（0.81±0.10）显著低于正常对照组（1.73±0.25）（P＜0.01）；经统计学分析CA患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞的变化与皮损局部的CD4+T细胞、CD8+T细胞的变化尚不能认为有相关性（P＞0.05）。结论CA患者存在细胞免疫功能降低，CA的发病（包括亚临床感染、潜伏感染）、复发及再感染与机体的细胞免疫功能密切相关，从而为CA的治疗提供理论依据。［关键词］尖锐湿疣；T细胞亚群；流式细胞仪；免疫组织化学PeripheralTcellsubsetandlocalcytoimmunef

4、unctionincondylomaacuminatum［Abstract］ObjectiveTostudythechangesofTcellsubset（CD4+,CD8+）inbothperipheralbloodandpartiallesionsinpatientsaacuminatum（CA）,andtherelationship.MethodsTodescribethelevelsofCD4+Tcell,CD8+TcellandCD4+/CD8+in42patientsalcontrolsbyfloetry;tocountthen

5、umbersofTcellsubsetinpartiallesionsediatedimmunodeficiencyexistsinpatientsediatedimmunity,aacuminatum；Tcellsubset；floetry；immunohistochemistry尖锐湿疣（condylomaacuminatum，CA）又称尖圭湿疣、生殖器疣（genitall至抗凝管中；2％利多卡因注射液局麻手术切除0.5cm大小皮损。1.2.2试剂外周血CD4+T细胞,CD8+T细胞抗体（CD4+FITC/CD8+PE）购自法国IMMU

6、NOTECH公司。免疫组化CD4+T细胞,CD8+T细胞抗体购自福建迈新生物技术开发公司。CD4+T细胞抗体为鼠抗人单克隆抗体（编号MAB－0251），工作浓度1∶20，CD8+T细胞抗体为鼠抗人单克隆抗体（编号MAB－0021），为工作即用型。SP试剂盒为福建迈新公司产品。1.2.3流式细胞仪分析采用美国COULTER公司生产的流式细胞仪。1.2.4免疫组化福尔马林浸泡组织，常规石蜡包埋组织，切片厚5μm。石蜡脱水3％双氧水室温孵育10min以消除内源性过氧化物酶的活性。蒸馏水洗涤5min。PBS液洗涤3遍。CD4+T细胞用EDTA进行抗

7、原修复，CD8+T细胞用枸橼酸热修复。血清封闭20min。倾去血清，分别加一抗，4℃过夜。室温放置30min。PBS冲洗，5min×3次。滴加二抗，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。滴加三抗，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。DAB显色。自来水充分冲洗，复染，封片。1.2.5统计学方法应用SPSS10.0统计软件进行分析。两样本均数比较采用t检验，两组指标间做相关分析。1.3结果判定流式细胞：计数每1万个细胞中标记细胞的百分比。免疫组化：以细胞膜出现棕黄色染色为阳性细胞。独立观察每张切片5个具有代表性的高表达

8、视野，分别计数每个高倍镜视野下阳性细胞的数量，计算均数和标准差。2结果2.1外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达见表1。表1外周血T淋巴细胞亚群检测结果注：各组两两比较，*