两种氟喹诺酮类药物对肺炎克雷伯菌防耐药突变浓度及耐药突变体耐药性的研究

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1、两种氟喹诺酮类药物对肺炎克雷伯菌防耐药突变浓度及耐药突变体耐药性的研究作者：邓晓慧郑风劲何文富孙爱慧刘小康【摘要】目的测定两种氟喹诺酮类药物(FQNs)对肺炎克雷伯菌(KP)的防耐药突变浓度(MPC)，比较其防耐药突变能力，了解突变耐药菌对FQNs的耐药性。方法肉汤法富集1010CFU/ml的菌液接种于不同浓度环丙沙星及加替沙星琼脂平皿上，采用琼脂二倍稀释法测定环丙沙星、加替沙星对临床分离肺炎克雷伯菌ATCC700603及其耐药突变体的最低抑菌浓度(MIC)、防耐药突变浓度(MPC)。对不同药物浓度筛选出的耐药突变株进行编码拓扑异构酶VIC亚单位基因parC和回旋酶A亚单位基因gyr

2、A喹诺酮耐药决定区的PCR扩增和测序，并测定外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙(CarbonylCyanidemchlorophenylhydrazone，CCCP)对环丙沙星和加替沙星MIC的影响。结果环丙沙星、加替沙星对ATCC700603的MPC分别为4、1.6mg/L，细菌耐药选择指数分别为16、4。两种药物的耐药突变体均出现了gyrA的第83位(TCC→ATC/TTG)均出现了突变，引起了相应氨基酸的改变(Ser83→Ile/Leu)。其中有一株同时也出现了第87位点(GAC→AAC)的改变，氨基酸也由Asp→Asn。除第二步突变体parC第80位点突变(AGC→ATC)，引起氨

3、基酸由Ser→Ile的改变外，其余几株均没有发生parC的突变。MIC测定结果显示，单用两种FQNs及合用CCCP的结果一样。结论加替沙星限制KP耐药突变株选择的能力强于环丙沙星，KP的耐药突变株对FQNs耐药的主要原因是gyrA和parC基因突变。【关键词】氟喹诺酮；肺炎克雷伯菌；耐药；防耐药突变浓度ABSTRACTObjectiveTodeterminemutantpreventionconcentration(MPC)oftoniae(KP)andparethecapacityoffluoroquinolonestopreventtheresistantmutantstrain

4、s.MethodsTheKPstrainATCC700603ingunitspermilliliter.Theminimalinhibitoryconcentration(MIC)andMPCofgatifloxacinandciprofloxacinforKPinedbyagarplatesdilutionmethod.Quinoloneresistancedeterniningregion(QRDR)ofparCandgyrAgenesplificationandgenesequencing.TheeffectofeffluxpumpinhibitorCCCPonMICsof

5、gatifloxacinandciprofloxacinforresistantmutantsidedbyagardilutionmethod.ResultsTheMPCofgatifloxacinandciprofloxacinforKPstrainATCC700603g/L,andtheMPC/MICutationincodon83,leadingtoaminoacidchange:Ser→LeuorSer→Ile.Atthesametime,aGAC→AACmutationinoacidchange:Asp→Asn.Exceptforthesecondstepmutant,D

6、NAsequencinganalysisofparCdidnotrevealpointmutation(AGC→ATC)leadingthesubstitutionofaIleforSerin4strains.AsfortheMICs,ofeastheMICsutantsisstrongerthanthatofciprofloxacin.ThemutationofgyrAandparCgenesaretheprimarymechanismsresponsingforresistanceofKlebsielapneumoniaetoFQNs.KEYutantpreventionconc

7、entration肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneunoniae，KP)是兼性厌氧的革兰阴性菌，通常存在于人类肠道及呼吸道，是目前重要的条件致病菌，其发病率［1］仅次于大肠埃希菌和铜绿假单胞菌。氟喹诺酮类药物(FQNs)是治疗KP感染的常用药，由于其广泛应用，KP对其耐药性逐年递增。目前，就新一代FQNs的耐药性及延长其临床使用寿命，国外学者Drlica提出了防耐药突变浓度(mutantpreventionconcentration，MPC)这一概