临床分离志贺菌耐药性及其对β-内酰胺类和氟喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究

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1、安徽医科大学硕士学位论文临床分离志贺菌耐药性及其对β-内酰胺类和氟喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究姓名：胡立芬申请学位级别：硕士专业：内科学（传染病）指导教师：李旭20070501安徽医科大学硕士学位论文英文缩略词表缩略词英文全称中文全称安徽医科大擘硕士学位论文缩略词英文全称中文全称MICCLSlPCRKr-PCRSBLsESBLsMinimalinhibitoryconccnwation最低抑菌浓度ClinicalandLaboratoryStandardIn啦jtII比美国临床及实验室标准Polymerasechainreaction聚合酶链反应Rov

2、e．fsoTranscriptasePCR逆转录聚合酶链反应B-lactamasesExtended-spectrumB·lactamases8．内酰胺酶超广谱B一内酰胺酶QRDRquinoloneresistancedeterminingregion喹诺酮耐药决定簇区∥一DNAgyraseASubunhDNA旋转酶A亚单位基因parCtopoisomcrasoIVCSubunit拓扑异构酶ⅣC亚单位EcoEscherichiacoli大肠埃希菌KpIIKlebsiellapne蜊oniae肺炎克雷伯菌Shigellaspp·S恬ff口speci器志贺菌

3、属2学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。学位论文作者签名：龃垒茎日期!兰塑2：上：五≥学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关保留，使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向囡家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的少量复制并允许论文进行学校图书管被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将

4、学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名：龋友芬日期：2‘’01．皇．1)导师签名：左侈魄磊rz多∞～

5、、0>安徽医科大学硕士学位论建临床分离志贺菌耐药性及其对B一内酰胺类和氟喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究中文摘要目的了解本省志贺菌耐药情况，以指导合理用药；了解安徽地区临床分离志贺菌中产超广谱B一内酰胺酶(ESBLs)和质粒介导Ampc型B一内酰胺酶情况；探讨lI盎床分离志贺菌螺旋酶A亚单位妙4基因及拓扑异构酶Ⅳc亚单位册圮基因突变与志贺菌对氟喹诺酮类药物的耐药表型的关系；研究临床分离志贺菌中主动外排系统acrAB

6、-tolC结构基因的分布和acrA口基因表达水平。材料与方法菌株来源收集我省35所医院2005年9月份临床标本中分离的志贺菌9l株，并常规保存于-70"C。药敏试验质控菌大肠埃希菌ATCC25922。方法采用平皿琼脂对倍稀释法检测我省35所医院2005年9月份收集的9l株志贺菌对多种抗菌药物的敏感性。用煮沸法提取细菌总DNA，碱裂解法提取质粒。用聚合酶链反应(PCR)方法扩增CTX-M组、OXA组、bla'mM．1、blasHv-l、ampC基[]。PCR产物纯化测序法明确肛内酰胺酶基因型．用细菌总DNA为摸板，PCR技术扩增gyrA和脚心基因的喹诺酮耐

7、药决定区(QRDR)相关序列和舯_B∞，c基因，用DNA直接测序的方法对26株(其中19株对环丙沙星耐药，7株对环丙沙星敏感)志贺菌的母剃及p口圮基因序列进行测序分析，结果至GenBank进行比对．3安徽医科大学硕士学位论文用RT．PcR测定15株多重耐药株和13株敏感株的acrAB基因mRNA表达水平。结果9l株志贺菌中，有福氏志贺菌57株、宋内志贺菌3l株、鲍氏志贺菌3株；91株志贺菌对头孢哌酮，舒巴坦和哌拉西林，他唑巴坦的耐药率明显低于其他头孢类抗菌药物，对碳青霉烯类敏感率达100％，对喹诺酮类环丙沙星及帕珠沙星的耐药率分别是27A7％、32．97

8、％。91株志贺菌产p．内酰胺酶的检出率为58株(63．7∞谚，产p内酰胺酶菌中bloraM．1、blacrx．M-l、blacrx．u．13、bZooXA．I和6地mⅨ扩增阳性率分别为62．07％(36／58)、17．24％(10／58)、24．14％(14／58)、36．21％(2u58)和10．34％(6／58)，产Ampc中全为EBC型：携带2种耐药基因的菌株占20．88％，携带3种耐药基因的为5．49％，未测出CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-25、OXA-2、OXA．10、SHV-I型。20株发生母叫第83位氨基酸改变，7株发生gyr

9、A第87位改变；9株发生即心第∞位氨基酸改变(SerSO—lle)，3株发生舶圮