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1、硫氢化钠后处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用【关键词】硫化氢后处理心肌细胞培养缺氧复氧损伤大鼠Abstract：ObjectiveToexploretheprotectiveeffectsofH2Sdonor-NaSHpostconditioningontheprimary-culturedneonatalratmyocardialcellsexposedtohypoxia/reoxygenation（H/R）injury.MethodsPrimary-culturedmyocardialcellsfromneonatalratslydivi
2、dedinto4groups:controlgroup（normal）,hypoxia/reoxygenationgroup（H/R）,hypoxiapostconditioninggroup（HPC）andNaHSpostconditioninggroup（H/R+NaHS）.AmodelofH/Rinjuryutase(SOD),andthecontentofmalondialdehyde(MDA)inedatthepointsofpre-hypoxia,hypoxiafor2handreoxygenationfor0.5h,1hand2h.Re
3、sultsNoobviouschangesmol·g-1and（0.986±0.042）mmol·g-1vs（1.120±0.045）mmol·g-1,P﹤0.05］;buttheSODactivityainedhigherthanintheH/Rgroup,andtheactivityofLDHandthecontentofMDAkepttobeloyocardialcellsagainsthypoxia/reoxygenationinjurybyenhancingthescavengingofoxygen-derivedfreeradicals.
4、Keyyocardialcellculture;hypoxia/reoxygenationinjury;rat缺血后处理(ischemicpostconditioning)［1］是可以有效对抗缺血/再灌注损伤的一种重要内源性保护机制，长时间缺血后再灌注前，短时间内反复短暂的再缺血处理，可以明显减轻缺血组织的缺血/再灌注损伤。药物后处理是用药物模拟缺血后处理的方式，试图达到与缺血后处理相似的保护效果。内源性硫化氢（H2S）作为新发现的气体信号分子，其心肌保护作用近年来受到高度的关注。研究发现，缺血前给予外源性硫化氢钠（NaHS）可改善因缺血/再灌注损伤
5、（ischemiareperfusioninjury,IRI）引起的心肌功能障碍和心肌损伤［2］。但NaHS后处理的心肌保护作用尚未见报道。本研究采用原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞，建立缺氧/复氧损伤模型，探讨NaHS后处理对培养心肌细胞IRI的保护作用及其可能的机制。1材料和方法1.1实验材料胎牛血清（杭州四季青有限公司）；DMEM培养基（GIBCO，America）；胶原酶I、胰蛋白酶（Sigma）；乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(malondi
6、aldehyde,MDA)试剂盒，考马斯亮蓝法蛋白测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所出品；其余试剂均为国产分析纯产品。二氧化碳培养箱（上海），N750紫外分光光度计（上海）。1.2实验方法1.2.1乳鼠心肌细胞原代培养选出生1～3天内的SpragueDaal组）：将心肌细胞放入37℃含95%空气、5%CO2的二氧化碳培养箱中，用复氧液〔mmol·L-1,0.9Na2HPO4，20.0NaHCO3,1.8CaCl2，1.2MgSO4,55.0葡萄糖,20.0HEPES(hydroxyerhylpiperazineerhanesulfonicacid,
7、羟乙基哌嗪乙磺酸)，129.5NaCl和5.0KCl，pH7.4〕培养4h。②缺氧/复氧组（H/R组）:参照文献［3］，将心肌细胞换用高纯氮气饱和30min、氧分压低于7kPa的模拟缺氧液(mmol·L-1，0.9Na2HPO4、6.0NaHCO3、1.8CaCl2、1.2MgSO4、40乳酸钠、20HEPES、98.5NaCl和10.0KCl、pH6.8)，并置于37℃含95%N2、5%CO2的密闭容器中缺氧2h，然后换为复氧液在二氧化碳培养箱中复氧2h。③缺氧后处理组（HPC组）：缺氧2h后，参照文献［4］方法给予缺氧后处理。先用复氧液培养5mi
8、n，然后换为缺氧液培养5min，复氧液5min/缺氧液5min重复3次，共计30min，再继续用复氧液培养1
