槲皮素对大鼠角膜碱烧伤后瘢痕形成的影响

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1、槲皮素对大鼠角膜碱烧伤后瘢痕形成的影响：刘彦芳，秦莉，张达，韩彩娟【摘要】目的探讨槲皮素(quercetin,QU)在大鼠角膜碱烧伤后抑制瘢痕形成的可能作用及其机制。方法建立SD大鼠角膜碱烧伤模型，以右眼为实验眼。SD大鼠随机分为5组，对照组术后予眼膏基质，QU治疗组分别予2.5、5、10、20g/kgQU眼膏。术后裂隙灯显微镜检查，记录角膜混浊程度。于术后第4、7、14、21、28天处死动物，行组织学染色观察炎性细胞的浸润；Masson三色染色法观察角膜基质层胶原纤维的排列和增殖；免疫组织化学方法检测

2、各组角膜组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和转化生长因子-βⅠ受体(TGF-βRⅠ)的表达。结果术后QU治疗组的角膜组织病理改变及角膜混浊程度较对照组轻，10g/kgQU和20g/kgQU组抑制角膜瘢痕形成作用强于2.5g/kgQU和5g/kgQU组，且10g/kgQU和20g/kgQU组间比较无统计学差异。HE染色和Masson染色均显示QU治疗组角膜基质层胶原纤维的密度较对照组低。碱烧伤后第7天TGF-β1和TGF-βRⅠ的表达达高峰，之后逐渐减少，接近正常水平；10g/kgQU和20g/kg

3、QU组抑制TGF-β1和TGF-βRⅠ的表达作用强于2.5g/kgQU和5g/kgQU组，且10g/kgQU和20g/kgQU组间比较无统计学差异。结论QU眼膏具有一定程度减轻瘢痕化的作用，尤以10g/kg浓度最佳。QU可能通过抑制TGF-β1和TGF-βRⅠ的表达发挥其作用。【关键词】槲皮素；角膜；碱烧伤；转化生长因子-β1；转化生长因子-βⅠ受体ChinaABSTRACT:ObjectiveToexplorethepossibleeffectandmechanismofquercetin(QU)in

4、inhibitingscarformationafterthealkaliburnofratscornea.Methodsasson三色染色法观察胶原纤维　　切片脱蜡至水，苏木素染5～10min后盐酸酒精分化，置丽春红品红酸性溶液中染色5～8min，蒸馏水冲洗，再用10g/L磷钼酸染1～3min，直接浸入苯胺蓝液中5min，迅速用水洗净，透明、中性树胶封片。　　1.7链酶亲和素免疫组织化学法(SABC法)检测TGF-β1和TGF-βRⅠ的表达　　切片常规脱蜡下行水化。按SABC法步骤行免疫组织化学染色

5、，一抗分别是1∶100的TGF-β1和TGF-βRⅠ，用PBS代替一抗作为阴性对照。实验所用抗体和SABC试剂盒均为武汉博士德公司产品。结果采用MoticMed6.0数码医学图像分析系统分析。在显微镜下(20×20)，每张切片随机测定5个视野的阳性染色密度，取其均值。　　1.8统计学分析　　实验数据以均数±标准差(±s)表示，采用SPSS13.0软件进行统计分析。5组资料间的比较采用方差分析，两两比较采用SNK检验。P<0.05为差异有统计学意义。　　　2结果　　2.1裂隙灯显微镜观察结果　　所有

6、术眼均未出现严重感染征象。各组术眼均出现不同程度的结膜充血、角膜水肿等。术后第28天，对照组角膜混浊明显，新生血管已到达角膜中央(图1)；10g/kgQU组角膜隐约可见淡淡的混浊，未见明显新生血管(图2)。角膜混浊程度评分结果显示，术后第28天，各组角膜混浊度评分有显著性差异(P<0.05)，5、10、20g/kgQU组评分明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；10、20g/kgQU组评分低于5g/kgQU组，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。表1大鼠角膜碱烧伤后第2

7、8天角膜混浊程度评分比较（略）与对照组比较，*P<0.05；与5g/kgQU组比较，△P<0.05。　　2.2HE染色及Masson染色结果　　术后第4天：对照组角膜肿胀明显，基质胶原纤维排列极其紊乱，可见大量炎性细胞浸润，成纤维细胞数量减少，角膜缘可见少量新生血管芽；2.5、5、10、20g/kgQU组角膜肿胀较对照组轻，10、20g/kgQU组角膜肿胀较2.5、5g/kgQU组轻，角膜基质胶原纤维排列较紊乱，可见中等量炎性细胞，角膜缘处未见明显新生血管芽。术后第7天：对照组角膜水肿较前有

8、所减轻，基质胶原纤维排列紊乱，成纤维细胞数量有所增加，炎性细胞明显增多，新生血管从周边向中央延伸，浅基质层内可见较多新生血管；2.5、5、10、20g/kgQU组角膜肿胀较对照组轻，10、20g/kgQU组角膜肿胀较2.5、5g/kgQU组轻，角膜基质胶原纤维排列较紊乱，炎性细胞较前有所减少，角膜缘处可见少量细小的新生血管。术后第14天：对照组角膜水肿较前明显减轻，基质胶原纤维排列仍紊乱，成纤维细胞数量明显增加、体积增大，炎性细胞较前有所减