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1、膀胱尿路上皮癌Fas相关死亡结构域蛋白表达及意义【摘要】目的研究Fas相关死亡结构域(FADD)蛋白在膀胱尿路上皮癌（BUC）组织的表达，并探讨其与肿瘤生物学行为之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测68例BUC及13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白表达。原位杂交法检测其中34例BUC组织FADDmRNA表达水平。结果正常膀胱黏膜FADD蛋白呈阳性表达。FADD的阳性率在不同组织学分级、不同临床分期的BUC组织中差异均有极显著性(χ2=15.38、11.34，P<0.01)；复发组与未复发组FADD的阳性率分别为36.84%和
2、53.33%,差异无显著意义(χ2=1.85，P>0.05)。BUC组织中FADDmRNA阳性率为44.12%,FADD蛋白阳性率为47.06%,两者差异无统计学意义(χ2=0.06，P>0.05)。结论FADD表达异常在BUC的发展中可能起着重要作用,FADD阳性表达与BUC病理分级、浸润关系密切，但与BUC复发无关。【关键词】Fas相关死亡结构域蛋白；膀胱肿瘤；免疫组织化学；原位杂交［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheFas-associateddeathdomain(FADD)p
3、roteinanditsbiologicalbehaviorinbladderurothelialcarcinoma(BUC).MethodsTheexpressionsofFADDin68BUCand13normalbladdertissuemunohistochemicaltechnique.OfRNA.ResultsThevariousexprssionsofFADDalbladdermucosa;thedifferencesofpositiveexpressionongdifferenthistologicalgradin
4、gandclinicalstaging(χ2=15.38,11.34;P<0.01);itsexpressioninrecurrentgroupandnon-recurrentgroupRNA(χ2=0.06,P>0.05)。ConclusionTheabnormalexpressionofFADDmayplayanimportantroleinthedevelopmentofBUC.ThepositiveexpressionofFADDinthecanceriscloselyrelatedtothepathologi
5、calgradingandinvasion,butnotrelatedtoitsrecurrence.［KEY）标准确定，其中浅表性(Tis~T1)肿瘤32例，浸润性(T2~T4)肿瘤36例。病理分级按世界卫生组织（厚连续组织切片，分别进行苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及原位杂交。所有病例术前均未经放疗、化疗及免疫治疗。1.2FADD蛋白检测采用免疫组化SP法。山羊抗人FADD单克隆抗体为SantaCruzBiotech公司产品,其工作浓度为1∶30；兔抗山羊血清及SP试剂盒为北京中山生物有限公司产品；DAB为Sigma公司产
6、品。用已知肺癌阳性切片作阳性对照，用PBS代替山羊抗人FADD单克隆抗体作阴性对照，DAB显色，苏木精复染，中性树脂封片。具体操作步骤按试剂盒说明书进行。结果判定标准：FADD蛋白阳性细胞为胞浆内有棕黄色细颗粒；每张切片随机选择5个高倍视野,每视野计数200个细胞(癌组织计数癌细胞,正常膀胱黏膜组织计数上皮细胞)，无阳性反应为阴性(-),阳性细胞数<25%为弱阳性(+),25%～75%为中度阳性(),>75%为强阳性()。1.3FADD核酸原位杂交探针序列：5′-GACCCGTTCCTGGTGCTGCT-GCACT
7、CGGTG-3′;5′-AGCTGGAGCGCGTGCAG-AGCGGCCTAGACC-3′;5′-GAGCAGAACGACCTGGAGCCCGGGCACACC-3′。实验严格按说明书进行,原位杂交阳性对照片由试剂盒提供,省去探针步骤为阴性对照。最后用DAB显色,镜下观察,FADDmRNA阳性细胞为胞质内有蓝色颗粒。结果判定标准:采用半定量分析方法（AB值法），连续观察5个高倍视野，每视野计数200个癌细胞。以染色强度评分：0分为细胞无着色，1分为浅蓝色，2分为深蓝色；以显色细胞比例评分：<25%为0分,25%～75%为1分
8、,>75%为2分。两项相加,得分<2分为阴性,2～4分为阳性。1.4统计学处理应用SPSS11.0统计学软件，采用χ2检验及Spearman相关分析进行统计学处理。2结果2.1FADD蛋白的表达13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白均呈阳性
