裙带菜茎硫酸多糖体外抗单纯疱病毒ⅰ型活性的实验研究

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1、裙带菜茎硫酸多糖体外抗单纯疱病毒Ⅰ型活性的实验研究：郝静，王一飞，张美英，刘秋英，康琰琰【摘要】　　目的研究裙带菜茎多糖体外抗单纯疱疹病毒1型（HSV-1）活性。方法采用空斑减数实验测定裙带菜茎粗多糖及纯化后多糖抗HSV-1活性，计算它们的空斑抑制率和IC50，并从药物对病毒的直接灭活作用、对病毒吸附的影响及对病毒释放的影响3个方面初探裙带菜茎多糖抗单纯疱疹病毒活性机理。结果裙带菜茎多糖能明显抑制HSV-1的致病变作用，IC50依次为8.04，13.54μg/ml。药物对病毒没有直接灭活作用，对病毒的释放也没有影响，主要影响了病毒的吸附。结论裙带菜茎多

2、糖有显著的抗HSV-1活性,且粗多糖比纯化后多糖活性要好，并且可以初步推测裙带菜茎多糖抗HSV-1活性是作用在病毒和受体结合、侵入Vero细胞阶段。【关键词】裙带菜茎细胞病变效应法(CPE)MTT法空斑抑制率　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheactivitiesofanti-Herpessimplex1virusofpolysaccharideextractedfromthecaudexofUndariapinnatifida.MethodsHSV-1thecaudexofUndariapinnatifidaedi

3、uminvariousconcentrations.After72hoursincubation,plaquesechanisminthreeaspects:virusinactivation,thedruginfluenceonvirusabsorptionandreleaseed.ResultsPolysaccharidehadconspicuousanti-Herpessimplex1virusactivities,theirIC50l，13.54μg/mlrespectively.Thedrughadnoinfluenceoninactivat

4、ingvirusandreleasefromthecell,hothecaudexofUndariapinnatifidahashasconspicuousanti-Herpessimplex1virusactivity,andtheactivityhappensinthebinding,absorptingstageofHSV-1releaseplex1virus，HSV-1）可引起唇疱疹、疱疹性角膜结膜炎和新生儿脑炎等多种疾病，艾滋病、癌症和器官移植等免疫低下者感染HSV-1的危险性大大增加。HSV-1感染所导致的疤痕化，已成为发达国家失明的主要原

5、因。而目前临床常用的治疗药物主要是无环鸟苷(ACV)等核苷类，其作用靶点是病毒DNA聚合酶，进而影响病毒的复制，但其毒性大，加之容易产生耐药性、抗病毒谱窄且价格高昂，故筛选研制毒性小，作用机理不同的抗病毒药物尤为重要。　　裙带菜Undariapinnatifida又名海芥菜，隶属于褐藻门(Phaeophyta)、游孢子纲(Phaeosporeae)、海带科(Laminariaceae)、裙带菜属(Undaria),从裙带菜茎中提取的水溶性多糖主要由硫酸多糖组成，有广泛的营养价值和药用价值，同时还可以达到“变废为宝”的目的。本文以Vero细胞作为体外筛选

6、细胞模型检测并比较不同剂量裙带菜茎硫酸粗多糖和纯化后多糖对单纯疱疹病毒1型的抑制作用，并对其抗病毒活性机理进行了初步探讨，为从传统中药中筛选新型抗病毒药物及进一步研究抗HSV-1活性机理提供参考依据。　　1材料　　四甲基偶氮唑（MTT），美国SIGMA公司；十六烷基磺酸钠（SDS），美国PROMEG公司；无环鸟苷(ACV)购于湖北科益药业股份有限公司；单纯疱疹病毒1型HSV-1F株于武汉大学病毒研究所；Vero细胞购于美国ATCC公司。　　新鲜裙带菜于2004年采自大连海面。由本实验室工作人员经水提醇沉法得到裙带菜茎粗多糖UPP1［1］。主要理化性质研

7、究可得：黄褐色粉末，氯化钡-明胶法测定粗提物硫酸根含量为16.94%。UPP1经过脱色，去蛋白处理后，又经过DEAEcellulose-52离子交换柱分级洗脱和SephadexG-200凝胶柱纯化得到其中的一个组分UPP2。其主要的理化性质是：白色絮状，相对分子量为2.06×105，主要由岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成。氯化钡-明胶法测定粗提物硫酸根含量为19.62%。　　2方法　　2.1病毒滴度测定将毒株作10倍系列稀释,常规方法感染单层Vero细胞,37℃、5％CO2培养3d,CPE法观察细胞病变情况,按ReedMuench［2］方法计算TCI

8、D50。　　2.2细胞毒性测定在单层Vero细胞中,加入7个不同浓度(1000，500，250