茜草醇提取物对刀豆蛋白a致小鼠肝损伤保护作用的研究

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1、茜草醇提取物对刀豆蛋白A致小鼠肝损伤保护作用的研究：王洁王淑静张炎朱佳佳王强【摘要】目的探讨茜草醇提浸膏对刀豆蛋白A(ConA)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用昆明种小鼠，灌胃给予6、10、16g·kg-1·d-1的茜草醇提浸膏和联苯双酯滴丸溶液(0.2g·kg-1·d-1)灌胃。14d后尾静脉注射ConA20mg·kg-1制备小鼠急性肝损伤模型，8h后取血用化学比色法检测血清ALT、AST活性;同时用酶联免疫法测定肝组织匀浆中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量的变化及观察肝脏病理学变化。结果与模型对照组相

2、比，茜草醇提浸膏16g·kg-1·d-1组小鼠ALT、AST活性明显降低(P<0.01)，肝组织匀浆中IL-1β、TNF-α的含量明显下降(P<0.01)，IL-4、IL-10含量升高(P<0.01)，能明显改善肝组织的病理学损伤。结论茜草醇提浸膏对ConA所致小鼠急性肝损伤具有保护作用。【关键词】茜草;急性肝损伤;细胞因子;刀豆蛋白A　茜草(RadixRubiaeCordifoliae)属植物所含的化学成分主要有醌类、环己肽类、三萜类和多糖等，其药理作用主要有解热镇痛、抗炎、抗氧化、抗癌、促凝和抗凝、抑制

3、病毒复制、稳定肥大细胞等作用[1]。本研究主要通过对茜草(地上部分)醇提浸膏能否调节刀豆蛋白(ConcanavalinA，ConA)引起的免疫性肝损伤血清中Th1/Th2细胞因子网络，观察其是否有保护肝脏的作用。　　1材料与方法　　1.1药品茜草，茜草醇提取浸膏由本室提取(用75%的乙醇提取3次，回收乙醇，得到浸膏)。　　1.2实验动物雄性昆明种小鼠60只，体重(20±2)g，8周龄，购自宁夏医科大学实验动物中心，动物合格证号:SCXK(宁)2005-0001。　　1.3主要试剂ConAⅣ型(美国Sigma公司);联苯双酯滴

4、丸(Bifendatepills，浙江万邦药业有限公司，批号0701003)，多聚甲醛(天津市福晨化学试剂厂，批号20080112)，谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20090815)。IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10ELISA检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司，批号2009.8.20)。　　1.4主要仪器721分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);高速低温离心机(日立公司CF16RX);DK-S14型电热恒温水浴箱(上海精宏实验设备有限公司)，550酶标仪(B

5、io-RAD公司)。　　1.5方法[2]将小鼠随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组，模型对照组，联苯双酯组(0.2g·kg-1·d-1)，茜草醇提浸膏高(16g·kg-1·d-1)、中(10g·kg-1·d-1)、低剂量组(6g·kg-1·d-1)。各组均灌胃给药，容量为0.2mL·10g-1·d-1，空白对照组和模型对照组给予等容量生理盐水，每天1次，共14d。末次给药4h后，除正常对照组尾静脉注射生理盐水外，其余各组动物均一次性尾静脉注射ConA20mg·kg-1。禁食，不禁水，8h后摘小鼠眼球取血，3000r·m

6、in-1，离心10min，收集血清待测。取左叶相同部位肝脏，4%多聚甲醛固定作病理切片。取肝左叶组织0.5g，用冷生理盐水洗去浮血，拭干，加冷生理盐水制成10%肝匀浆，3000r·min-1，离心10min，取上清液待测。　　1.6测定指标血清ALT、AST活性均按试剂盒要求测定;肝组织匀浆IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10采用ELISIA检测试剂盒按说明测定。　　1.7统计学方法用SPSS统计软件计算结果以均数±标准差(±s)表示，两组样本均数间比较采用t检验，多组样本均数间比较采用One-wayANOVA检验，

7、P<0.05为差异具有统计学意义。　　2结果　　2.1肝脏组织病理学观察正常对照组小鼠肝脏外观呈红褐色，质地软而富有弹性;肝小叶结构完整，细胞排列整齐，无炎细胞浸润。模型对照组小鼠肝脏体积增大;肝细胞变性明显，可见细胞气球样变，胞浆疏松化及灶状坏死，严重的呈片状坏死，汇管区可见大量炎症细胞浸润，呈片状坏死。联苯双酯组和茜草醇提浸膏高剂量组肝脏略有水肿，质地柔软;肝小叶结构基本完整，细胞排列较整齐，只有少量的炎细胞浸润，较模型组有明显改善。茜草醇提浸膏中、低剂量组小鼠肝脏体积也有所增大，肝细胞亦有变性，细胞气球样变，局部

8、有灶状坏死，炎细胞浸润较多，较模型组有所改善(图1，见封4)。　　2.2茜草醇提浸膏对血清ALT和AST的影响与模型对照组相比，茜草醇提浸膏各剂量组可使ConA所致肝损伤小鼠血清ALT、AST活性显著降低(P<0.05)，结果见表1。　　2.3茜草醇提浸膏对肝脏匀浆中细胞因子的影响与