骨髓间充质干细胞接种小鼠肝癌组织对小鼠生存期的影响

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1、骨髓间充质干细胞接种小鼠肝癌组织对小鼠生存期的影响作者：吕昕蕾，张南征，陈复兴，刘军权，孙蕾清【摘要】目的研究骨髓间充质干细胞（MSC）接种于原发性肝癌Heps荷瘤小鼠对其生存期的影响。方法体外贴壁培养法制备昆明小鼠骨髓MSC，分离培养传代扩增，流式细胞仪鉴定MSC表型。4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)对MSC进行标记备用。随机取54只8周龄昆明小鼠，建立Heps肝癌移植瘤模型。移植瘤长径达0.5～0.8cm时，随机分为MSC组、DAPI标记MSC组（DAPI组）、生理盐水(NS)对照组（NS

2、对照组），每组18只。MSC组及DAPI组分别在小鼠Heps肝癌移植瘤内注射2×106MSC及DAPI标记的MSC，NS对照组注射同体积的NS。每组各有6只荷瘤小鼠用于观察生存期。①自注射日起，隔日测量各组小鼠肿瘤长、短径，计算注射后3、7、14及28天的肿瘤体积；②记录注射当天开始至小鼠死亡的时间，计算各组小鼠平均生存时间；③于注射后3、7、14及28天，各组分批处死3只小鼠。取肿瘤组织，石蜡包埋并切片，苏木精-伊红染色后光学显微镜观察。结果①体外贴壁法成功制备MSC，流式细胞仪对第3代MSC进行鉴定，高表达CD29（97.84%），低表达CD34(5.56%

3、)、CD45（7.66%）。②小鼠Heps肝癌腹水瘤细胞成功制备小鼠Heps肝癌移植瘤模型，成瘤率100%。③注射MSC后1周，MSC组及DAPI组肿瘤体积增大明显，与NS对照组差异有显著性（P<0.05）。④MSC组平均生存期为45天（95%可信区间：33～56天），DAPI组平均生存期为34天（95%可信区间：31～37天），NS对照组平均生存期为33天（95%可信区间：28～37天）；MSC组与NS对照组差异有显著性（P<0.05），其余组间生存期差异无显著性（P>0.05）。⑤各组小鼠肿瘤苏木精-伊红染色：28天时，MSC组及DAPI组

4、肿瘤组织坏死明显，范围较NS对照组更大。结论MSC可在原发性肝癌Heps荷瘤小鼠肿瘤组织内定植，MSC接种后1周内肿瘤增长迅速，小鼠生存期延长。【关键词】肝肿瘤，实验性；间充质干细胞；Heps肝癌；小鼠Abstract:ObjectiveToinvestigatetheimpactofmesenchymalstemcells(MSC)inoculatedintotheestablishedmodelofHeps-bearingmiceonsurvivaltime.MethodsMSCethod.PhenotypesofMSCetry.MSCiceas.SCgro

5、up，MSClabeledalsaline(NS)controlgroup（NScontrolgroup）.MSCandMSCmarkedbyDAPIinistratedintothemouserightrearbacktumortissueof2×106.TheNScontrolgroupinistratedevolumeofNS.6miceineachgroupe.①Thesizeoftheimplantedtumorseasuredevery2daysandthetumorvolumeeofthetumor-bearingmiceeansurvivalti

6、meicefromeachgrouportissuesamplescollectedatabove4timepointsbeddedinparaffinforroutinepathologicalsection,hematoxylin-eosinstainingandlightmicroscopyobservation.Results①PurifiedMSCethod.Passage3cellsetry.TheresultsshoodelofHeps-bearingmiceorformationis100%.③Atthefirstinistrated,thevo

7、lumeofthetumorsarkedlyincreasedintheMSCgroupandtheDAPIgroupparedeansurvivaltimeeansurvivaltimeeansurvivaltimeinistrated,thereortransplantationofHeps-bearingmice.InthefirsteoftumorintheMSCgroupisincreasedquickly.ThesurvivaltimeofHeps-bearingmiceisprolonged.Keys,experimental;mesenchyma

8、lstemcells;H