香草兰豆荚中香兰素测定

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1、香草兰豆荚中香兰素的测定NY／T713——20031 范围本标准规定了属于Vanillafragrans(Salisbury)Ames和syn．VanillaplanifoliaAndrews种的香草兰中香兰素测定方法。本标准适用于香草兰豆荚、切段和粉末中香兰素的测定。本标准不适用于香草兰豆荚抽提物中香兰素的测定。   本标准描述了分析香兰素的三个分析方法：a) 高效液相色谱法；b) 紫外分光光度法；c) 气相色谱法。2 规范性引用文件   下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改

2、单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。   GB／T12806 实验室玻璃仪器 单标线容量瓶3 高效液相色谱法(仲裁方法)试样进行抽提和稀释，加入内标物，用高效液相色谱法(HPLC)分离，再用紫外检测器测定香兰素的含量。3．2 试剂   分析纯试剂、蒸馏水、去离子水或相等纯度的水3．2．1 乙醇，95％(体积分数)。3．2．2 甲醇。3．2．3 磷酸溶液：c(H3PO4)＝0．01mol／L。3．2．4 流

3、动相：用25份甲醇(3．2．2)与75份稀磷酸(3．2．3)混合。用膜(3．3．3)过滤、脱气。3．2．5 香兰素(4—羟基—3—甲氧基苯甲醛)为对照标样，纯度大于99％。3．2．6 内标物：乙酰水杨酸，纯度大于99％。3．2．7 香兰素储备液：称取一定量的香兰素(3．2．5)，精确至0．001g。用流动相配制成为浓度为1g／L的标准储备液。3．2．8 工作溶液   用流动相(3．2．4)稀释储备液(3．2．7)，获得工作溶液，使工作溶液的浓度符合3．2．8．1中的要求。   香兰素工作溶液浓度为0．1g／L可在4℃下暗处保存不超

4、过10天。3．2．9 内标物溶液   将乙酰水杨酸(3．2．6)溶解于流动相(3．2．4)中，使其浓度为0．6g／L，称量时精确至0．001g   注：内标浓度应与样品溶液中香兰素浓度基本一致。3．3 仪器3．3．1 气密研磨器。3.3.2单标容量瓶，容量为100mL和200mL，符合GB／T12806的要求。3.3.3过滤膜，孔径为0．45µm。3.3.4高效液相色谱仪：—紫外检测器；—进样装置；—色谱柱：C18硅胶柱，5／µm～10／µm粒径。3.3.5注射器：用于高效液相色谱。3.3.6分析天平，精确度为0．001g。3．4

5、 试样的制备   将样品(香草兰豆荚、切段或香草兰粉)研磨并使之充分混匀。3．5 称样   称20g已制备好的样品，准确至0．001g。3．6 抽提   在抽提仪器(3．3．4)中用大约200mL乙醇(3．2．1)抽提试样(3．5)16h，即溶剂进行25次～30次循环。   每一100g豆荚用1L溶剂抽提。   将抽提物转移至一个200mL的容量瓶(3.3.2)中。用少量的乙醇清洗抽提仪器中的烧瓶数次，并将洗出液加入容量瓶中，乙醇定容并混合均匀，   用流动相稀释该溶液10倍。3．7 分析步骤3．7．1 色谱操作条件    流动相

6、(3．2．4)流速大约为1mL／min,在3.3．5规定的条件下室温进行分析。3．7．2 校准3．7．2．1 对照标准品和内标物分别进样，然后两者混合起来进样。调整操作条件使内标和样品峰的分辨率大于1。3．7．2．2 经过膜(3．3．3)过滤后3．6中制备的样品上机测定。3．了．2．3 用10mL内标物与10mL3．2．7所得到的标准溶液混合。用膜过滤上机进样测定峰高或峰面积。   校正因子(ki)由式(1)给出。                        …………………………………………(1)式中：ki——待测定的组份中组份

7、i的响应系数；mi——上机溶液中组份i中的质量，单位为毫克(mg)；ms——上机溶液中内标物的质量，单位为毫克(mg)；hi——组份i的峰高度，单位为厘米(cm)；hs——内标物的峰高度，单位为厘米(cm)。注：式中峰高可由其峰面积代替。3．7．3 测定3．7．3．1 用10mL内标物与10mL根据3．6制备的样品溶液混合。用膜过滤。3．7．3．2 在3．7．2．3规定的条件下将3．7．3．1所得到的溶液进样。   待测定的物质的质量用式(2)计算：                             ………………………………

8、…………(2)式中，各符号的含义与3．7．2．3中的相同。注：式中的峰高可由其峰面积代替。4  紫外分光光度法4．1 原理   试样中所含的香兰素用乙醇抽提，用紫外分光光度法测定乙醇溶液中的香兰素含量。4．2 试剂   分析纯试剂、蒸馏水、去离子水