鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、ChineseJournalofVeterinaryMedicine中国兽医杂志2015年(第5l卷)第4期3鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定陈延飞，覃尧，李夏莹，王永强，李晓齐，曹红，郑世军(中国农业大学动物医学院农业生物技术国家重点实验室，北京海淀100193)摘要：为制备CIAVVP2单克隆抗体，将原核表达的His—VP2融合蛋白作为免疫原免疫BALB／c小鼠。经4次免疫后，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2／0)融合。将原核表达的GST—VP2融合蛋白作为包被抗原，利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后，获

2、得3株稳定分泌抗CIAVVP2蛋白的杂交瘤细胞克隆，分别命名为3D7、3B8、2D3。经间接ELISA测定，以上3株杂交瘤细胞腹水效价分别为1：8．0~10、1：4．0xlO，以及1：6．4xl06，亲和力解离常数分别为7．34x10、2．65x10-“，以及2．98x10。IgG亚类分别为IgGl、IgG2b以及IgG2b。经WesternBlot试验证明，3D7株单抗能特异地识别CIAVVP2蛋白，其识别的抗原表位区域为VP2N一端的20~40aa。经IFA试验证明，3株单抗均能识别天然的CIAVVP2蛋白。此单抗为研究CIAVVP2的生物学

3、功能和CIAV致病机理奠定基础。关键词：鸡传染性贫血病毒；VP2蛋白；原核表达；单克隆抗体中图分类号：$852．65文献标志码：A文章编号：0529-6005(2015)04—0003—04DevelopmentandidentificationofmonoclonalantibodiesagainstChickenInfectiousAnemiaVirus(CIAV)VP2CHENYan—fei，QINYao，LIXia—ying，WANGYong—qiang，LIXiao—qi，CAOHong，ZHENGShi-jun(StateKeyLab

4、oratoryofAgrobiotechnology，CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China)Abstract：Inordertodevelopmonoclonalantibodies(MeAbs)againstCIAVVP2。wevaccinatedBAⅡI／cmicewithHis-VP2protein．AnindirectELISAusingGST—VP2proteinascoatingantigenwasestablishedt

5、oscreenpositiveclones．Weobtained3hybridomacellclonestllatstablysecretedMcAbsagainstVP2andthesecloneswerenamed3D7，3B8and2D3，respectively．Thetitersinascitefluidwere1：8．0xl05，l：4．0xl05，l：6．4xl，respectively．1hedissociationconstants(Kds)were7．34x10-“，2．65~10-“，2．98x10-“，respective

6、ly．rI11eisotypesweredeterminedtobeIgG1．IgG2bandIgG2b．eMcAb3D7speciticallyboundtoⅥP2anditsbindingdomainwaslocatedbetween20to40aaofVP2asdemonstratedbyWesternBlot．TheseMcAbsspecificallyrecognizedVP2inCIAV-infectedMDCC-MSBlceUsasexaminedbyIndirectFluorescenceAntibodyassay．TheseMc

7、AbswouldhelptoanalyzethebiologicalactivitiesofCIAVVP2andelucidatethemechanismofCIAVinfection．Keywords：CIAV；VP2；prokaryoticexpression；monoclonalantibodyCorrespondingauthor：ZHENGShi-jun鸡传染性贫血是由鸡传染性贫血病毒(Chicken病毒感染。CIAV在一些出血综合征、再生障碍性贫infectiousanemiavirus，CIAV)引起的一种鸡的免疫抑血的多病因疾病中

8、起到重要作用。制性疾病。1979年Yuasa等在日本首次分离到CIAVCIAV属于圆环病毒科、环病毒属，是一种无(Gifu一1株)】，我