蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定.pdf

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1、第33卷第6期中国预防兽医学报Vo1．33．NO．62011年6月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJun．2011doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．06．13蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定王凌凤，杨涛，孙恩成，耿宏伟，秦永丽，赵晶，蔡绪禹，刘霓红，李文京，吴东来(1中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001；2．中国动物疫病预防控制中心，北京1

2、00125)摘要：为制备蓝舌病病毒(BTV)血清17型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位，本研究用原核表达系统部分重叠表达的两段VP2蛋白共同免疫BALB／c小鼠，采用细胞融合技术获得杂交瘤细胞，通过以重组VP2蛋为白包被抗原的间接ELISA筛选获得2株稳定分泌抗BTv17VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株，分别命名为3F4和4H10。Ig亚类鉴定2株MAbs均为IgG1／14．链。Westernblot证明，2株MAbs均能识别重组VP2蛋白。间接免疫荧光试验表明：2株MAbs均与BTV17呈阳性反应，其中MAb3F4

3、与BTV1、BTV2、BTV3、BTV5、BTV8、BTV1l、BTV13、BTV16、BTV23、茨城病病毒(IBAV)、牛轮状病毒(BRV)、牛呼肠孤病毒(RV)均呈阴性反应，但与BTV10和BTV24呈弱阳性反应。利用合成多肽对VP2抗原表住鉴定结果表明，MAb3F4识别的抗原表位为PWNNR，MAb4H10识别的抗原表位为PWNNRA~。本研究结果为建立BTV17型特异性检测方法及vP2功能研究奠定了基础。关键词：蓝舌病病毒血清17型；VP2；原核表达；单克隆抗体；抗原表位中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1

4、008—0589(2011)06—0465—06PreparationofthemonoclonalantibodiesagainstVP2proteinofbluetonguevirusserotype17andtheVP2B—cellepitopeidentificationWANGLing-feng，YANGTao，SUNEn-cheng，GENGHong—wei，QrNYong—li，ZHAOJing，CAIxu-yu，LIuNi-hong，LIWen-jing~，wuDong一1ai(1．StatekeyLaborator

5、yofVeterinaryPublicHealthofMinistryofAgricultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnologyHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．ChinaAnimalDiseaseControlCenter，Beijing100125，China)Abstract：Inthisstudy，monoclonala

6、ntibodies(MAbs)againstbluetonguevirus(BTV)serotype17weredevelopedbyfusionthemyelomacellswithspleencellsfromBALB／cmiceimmunizedwithpurified2partialoverlappingrecombinantVP2ofBTV17．TwohybridomacelllinesstablysecretingMAbsagainstVP2ofBTV17，designated3F4and4H10，wereidentif

7、iedbyindirectELISAusingtherecombinantVP2ascoatingantigen．BothofMAbscouldreactwithrecombinantVP2bywesternblot．IndirectimmunofluorescenceassayindicatedthatbothofMAbscouldreactpositivelywithBTV17．butMAb3F4wasshowed*Correspondingauthor收稿日期：2010．11．20基金项目：国家863项目(2007AA02Z4

8、06)；黑龙江省自然科学基因项目(ZJN一0602—01)作者简介：王凌凤(1985一)，女，山东烟台人，硕士研究生，主要从事分子病毒学和分子免疫学研究通信作者：E—mail：dlwu@hvri．ac．cn中国预防兽医学报2011年w