植物组织培养问题释疑.doc

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1、植物组织培养问题释疑　　问题一、　　在选修3的现代生物技术专题中，经常会出现许多影响操作的因素，如植物组织培养脱分化和再分化的影响因素。　　植物组织培养的影响因素有哪些？　　植物组培的影响因素　　试题：（2018年4月浙江选考试题）取田间不同品种水稻的幼胚，先进行　　，然后接种到培养基中培养，幼胚发生　　形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及　　（答

2、　　2点即可）。　　答案：消毒；脱分化；水稻的基因型、愈伤组织继代的次数　　解析：进行组织培养前，要先对外植体（题中幼胚）进行消毒，幼胚先发生脱分化形成愈伤组织。影响愈伤组织能够成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及水稻的基因型、愈伤组织继代的次数等。　　植物组织培养影响的因素有内因和外因。　　内因　　主要是遗传特性和生理特性，不同的器官组织类型产生的愈伤组织器官分化明显不同，这是由基因型决定的；个体发育的年龄，如发育细嫩的组织容易脱分化为愈伤组织，也容易诱导器官分化；

3、愈伤组织生理状态，如继代的次数越多，器官分化能力越差。　　外因　　主要有营养条件（无机盐、有机物、植物激素和天然复合物等）和环境条件（渗透压、光照、温度、湿度和pH等）。　　[资料1]在快速繁殖颤杨时，如果我们将一个枝条平均分成三段，结果发现，靠近顶端的那一段枝条的侧芽离体培养时繁殖系数最高，中间的次之，基部的最低。　　结论：外植体在植株上的着生位置对其脱分化及再分化有一定的影响。　　[资料2]在MS培养基中加入质量分数为0.5mg/L的6-BA和质量分数为0.5mg/L的NAA，可诱导胡萝卜形成愈伤

4、组织；在MS培养基中加入质量分数为2mg/L的KT（激动素）和质量分数为0.2mg/L的NAA，可诱导胡萝卜生出丛芽；在MS培养基中加入质量分数为0.1mg/L的NAA，可诱导胡萝卜生根。　　结论：生长素及细胞分裂素的比例可影响细胞的脱分化及再分化。　　[资料3]将外植体培养在黑暗条件下，10天左右即可形成高度液泡化的愈伤组织，但是若将外植体培养在光照条件下，发现细胞分化产生维管束等组织，而不形成愈伤组织。　　结论：愈伤组织的形成需要避光。　　[资料4]研究烟草组织培养时发现，烟草芽的形成以28度为好

5、，在12度以下，33度以上形成率均很低。　　结论：脱分化及再分化都需要在适宜的温度条件下进行。　　问题二　　大家都知道植物的全能性比动物细胞容易得多，但植物组织培养也会受到许多因素的影响。浙科版选修3教材第23页有一较大篇幅专门讲了植物组织培养的影响因素（如下所示）。　　选修3教材第23页　　影响植物组织培养全能性表现的因素有哪些？　　典型试题解析　　试题：（2018年4月浙江省选考试题）回答与基因工程和植物克隆有关的问题。　　（1）将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性

6、核酸内切酶EcoR　　I酶切，在切口处形成　　。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接。在两个片段相邻处形成　　，获得重组质粒。　　（2）已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成　　实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是　　，从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。　　（3）取田间不同品种水稻的幼胚，先进行　　，然后接种到培养基中培养，幼胚发生　　形成愈

7、伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及　　（答2点即可）。　　答案：　　（1）粘性末端；磷酸二酯键　　（2）转化；使CaCl2处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态　　（3）消毒；脱分化；水稻的基因型、愈伤组织继代的次数　　解析：　　（1）用限制性核酸内切酶EcoR　　I酶切含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121，可在切口处形成黏性末端。用DN

8、A连接酶连接含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121，可在两个片段相邻处形成磷酸二酯键，获得重组质粒。　　（2）取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成转化实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是：使CaCl2处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态。　　（3）在进行植物组织培养时，取田间不同品种水稻的幼胚，先进行消毒，以清除其表面附着的微生物；然后接种到培养基中培养，幼胚发生脱分化形