ASIC-3在小鼠转移性肿瘤癌痛模型中的表达与作用

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1、万方数据江苏大学硕士学位论文摘要癌痛是一类广泛存在于肿瘤患者群体

2、一I-,，临床常见的慢性顽固性疼痛，严重影响着病患个体及家庭的生活质量。治疗上，受限于成瘾性、耐受性差等缺点，世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WHO)推荐的“三阶梯止痛方案”及阿片类药物的应用，暂未能达到令人满意的镇痛效果。目前，针对疼痛形成、传导过程中有关酸敏感离子通道(acid．sensingionchannels，ASICs)参与作用的研究日渐增多。现已知缺氧和组织酸化是实体肿瘤微环境的重要特征，可以通过进一步了解ASICs在癌痛形成过程中的相关变化，来为我们

3、在肿瘤患者的镇痛治疗上提供新的方向和思路。本研究拟通过建立小鼠转移性足跖皮肤癌痛模型，采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionPCR，RT-PCR)、蛋白质免疫印迹试验(Westernblotting)技术，检测肿瘤生长期内不同时间点酸敏感离子通道．3(ASIC．3)在小鼠脊髓背根神经节(dorsalrootganglion，DRG)和肿瘤原位上mRNA、蛋白表达量的变化；并结合其抑制剂天麻素在癌痛中的应用，通过检测小鼠疼痛行为学表现和DRG中ASIC．3的表达变化，来探讨ASIC．3与癌痛产生的相关性，为临床癌痛的基础研究和镇痛药物药

4、理学分析提供帮助。第一章小鼠转移性足跖皮肤癌痛模型的建立目的：建立小鼠转移性足跖皮肤癌痛模型。方法：选取21只Balb／c系小鼠，雌性，8周龄，体重20"～259，完全随机分为3组，每组7只：正常组、假手术组和癌痛组。癌痛组每只小鼠左后趾跖面皮下注射20pl包含约2×105数量4T1小鼠乳腺癌细胞的PBS混悬溶液，假手术组小鼠注射等剂量的PBS溶液，正常组不作任何处理。观察实验各组小鼠4T1乳腺癌细胞接种前及接种后1、3、5、7、9、11、14天一般情况、肿瘤接种侧足趾软组织外观、小鼠无痛行走行为学评分、热板试验诱发小鼠热刺激爪回缩阈值改变结果。结果：正常、假

5、手术两组间比较，造模后小鼠无痛行走行为学评分和热刺激爪回缩阈值改变，记录数据无统计学差异(P>0．05)；与正常组、假手术组比较，癌痛组小鼠肿瘤接种后第5日起，接种侧足趾软组织瘤体渐增大，无痛行走评分开始逐渐升高，第7日起，热刺激爪回缩阈值出现逐步缩短(P

6、肤癌痛，动物模型第二章ASIC．3在转移性足跖皮肤癌痛小鼠脊髓表达的变化目的：检测ASIC．3在癌痛小鼠DRG神经元与肿瘤原位上表达的变化。方法：癌痛动物模型的建立方法同第一部分。分别摘取正常组、假手术组小鼠与癌痛组肿瘤接种5、9、14天后小鼠L4．5节段脊髓DRG组织和肿瘤原位皮肤组织，采用RT-PCR、Westernblotting技术检测小鼠不同肿瘤生长期内，DRG与肿瘤原位上ASIC．3mRNA和蛋白表达量的相关改变。结果：正常、假手术两组问比较，小鼠脊髓DRG、肿瘤原位上ASIC．3mRNA、蛋白表达水平差距无统计学意义(P>0．05)；与正常组、假

7、手术组比较，癌痛组肿瘤接种后第5天，小鼠脊髓DRG、肿瘤原位上ASIC．3mRNA、蛋白表达水平呈现逐渐升高趋势(P<0．05)；第9日起致第14天，升高趋于明显(P<0．01)。结论：转移性足跖皮肤癌痛组小鼠肿瘤细胞接种后，其脊髓DRG、肿瘤原位上ASIC．3mRNA、蛋白表达水平呈增强表现。关键词：DRG，肿瘤原位，ASIC．3，mRNA，蛋白质第三章天麻素在小鼠转移性癌痛中的镇痛作用目的：研究天麻素对小鼠转移性肿瘤诱发癌痛的镇痛作用。方法：癌痛小鼠模型建立方法同第一部分。选取35只Balb／c系小鼠，雌性，8周龄，体重20"---'259，完全随机分为5

8、组，每组7只：正常组、假手术组、天麻素低剂量组(90mg／kg)、天麻素高剂量组(180mg／kg)和吗啡组。于造模后第11天，小鼠给药后第15、30、60、90、120、150、180分钟，行热板试验，检测热刺激爪回缩阈值变化。并检测高剂量组ASIC一3mRNA在小鼠DRG神经元上相应的变化，方法同第二部分。结果：与正常组、假手术组比较，给药后第60分钟，低、高剂量天麻素组小鼠热刺激爪回缩阈值均出现延长(P<0．05)，第90分钟，达到峰值(P

9、低于其他组(P<0．01)。结论：天麻