分枝杆菌的实验室诊断

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1、LaboratoryMethodsfortheDiagnosisofMycobacterium分枝杆菌的实验室诊断高雄荣总病理检验部微生物科窦慧琴99.10.198/9/20211实验室诊断方法药敏试验(4-12ds)培养(42ds-Negative)鉴定(7ds)染色镜检(24hs)分生(7ds)8/9/20212课程目标(1)了解结核菌的培养检体收集的方法检体收集的容器检体的前处理接种的培养基了解抗酸性染色、原理及判读标准了解MTB的鉴定方法认识自动化培养仪器(MGIT960)鉴定仪器(ProbeTec)原理及操作方法TiB

2、iliatest8/9/20213课程目标(2)了解NTM的鉴定方法PCR-PFLPMethod了解分子生物学鉴定方法-PCRrestriction-enzymeanalysis(PRA)之原理、操作、及结果判读Biochemistryreactionsmethod了解药敏试验的方法及使用的药物8/9/20214GeneralCharacteristicsGPB:0.2-0.4x2-10umStrictlyaerobic5-10%CO2enhancegrowthHighlipidsincellwallMycolicacidLon

3、gchainfattyacid(cellwall60%)HydrophobicAcidfastnessResistacidandalkali8/9/20215结核菌的培养检体收集的方法检体收集的容器检体的前处理接种的培养基8/9/20216检体采集采集时间Sputum以清晨第一口痰为佳(3-5mL)Gastriclavage15mL清晨抽取胃液体液采集次数取痰前应先以开水漱口，减少食物残渣为提高培养率，应连续采检3天检体保存及运送尽速送检，4oC保存，以避免杂菌生长8/9/20217分枝杆菌检体收集容器50cc蓝头离心管Sput

4、um<5ccGastriclavage15cc胃液用的容器需加入Na2CO3可中和胃酸Urine>40ccTissue,pusStool<5cc15cc绿头离心管Bodyfluids>2ccFungalmediumBonemarrow/blood检体收集容器：宽口,螺旋盖,防摔,避免泄漏胃液痰液尿液体液8/9/20218加等量的6%NaOH-NALC-Sodiumcitrate化痰液强力Vortex约15-20秒挑取约5ml痰液至50ml离心试管室温静置20分钟加无菌PhosphateBuffer至约45ml,盖紧盖子离心3,8

5、00rpm约15分钟(4℃)倒掉上清液,留下2ml接种:取0.5ml检体至MGITtube0.1ml检体至LJ培养基同时做一片抹片染AcidFastStain检体处理8/9/202198/9/202110接种的培养基MGIT(MycobacterisGrowthIndicatorTube)ModifiedMiddlebrook7H9BrothRutheniumfluorescentcomplexMGITOADCOleicAcid：供分枝杆菌生长时利用Albumin：键结干扰分枝杆菌生长的游离脂肪酸Dextrose：提供能量来源C

6、atalase：破坏具毒性的过氧化物MGITPANTA抗菌剂及抗霉菌剂抑制非分枝杆菌生长包含下列5种抗生素：PolymyxinB、AmphoterinB、Nalidixicacid、Trimethoprim、AzlocillinLowenstein-Jensenslants8/9/202111MGITTechnologyNegativeCultureFFFO2FO2FO2FO2FO2FFO2FO2CO2O2O2O2O2O2O2VialHeadspaceGrowthMediumSensorLittleorNoFluorescenc

7、eFFFFFO2FO2FFFFCO2O2O2O2VialHeadspaceGrowthMediumSensorPositiveCultureStrongFluorescence8/9/202112InoculationandIncubationMGIT960(Becton-DickinsonDiagnosticInstrumentSystems)Inthe35℃incubator0.5cc-culturefor6weeksLowenstein-JensenslantsInthe35℃incubator0.1cc-culturef

8、or8weeks.IdentificationBDProbeTecETsystemCTBassay8/9/202113IncubationTemperatureMost:35-37℃Skin&softtissue:25-30℃M.marinum,M.haemop