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《胚胎干细胞分化为表皮样细胞的基因表达谱差异论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、胚胎干细胞分化为表皮样细胞的基因表达谱差异论文.freelbleGen135k小鼠全基因表达谱芯片(含44170个基因)杂交,荧光扫描,筛选出差异表达基因,并进行GO分析和pathouseembryonicstemcells(ESC)andtheirdifferentiatedepidermal-likecells(ELC)icexpressionprofilechip,andexplorethemolecularmechanismsofdifferentiationfurther.【Methods】MouseESCana
2、mnionrepeatedforthreetimes.TotalRNAofESCandELCplifiedbyRT-PCR.TheproductcDNAbleGen135kmouseeQuantitativePCR.【Results】Atotalof4,856genesshoainlyinvolvedcellularprocess(CP)genesof1931,Cell/Cellpartgenesof2391,andbindingfunctiongenesof1869,olecularfunction(MF),respec
3、tively.ThepathainlyinvolvedgenesrelatedtoDNAreplication,proteasomepathepathberof23,24,47,and44,respectively.【Conclusion】Thechangeofexpressionprofilebeteexpressionchip;EScells;epidermal-likecells;GOanalysis;patha公司?Caveolin-3?GLUT4和β-actin抗体为SantaCrus公司产品?2-脱氧-3H葡萄
4、糖购自Amersham公司?其它试剂为国产分析纯?大鼠在23±2℃,12h光/暗周期循环(早7点开始给予光照)条件下饲养?饲养1周后在乙醚麻醉下切除大鼠双侧卵巢?2周恢复期后,大鼠随机分为3组(每组6~8只),正常饮食组(NORM),给予正常饮食?高脂饮食组(HFD,高脂高糖饲料配制方案:10.0%猪油,20.0%葡萄糖,2.5%胆固醇,1.0%胆酸和66.5%常规饲料)和高脂饮食加白藜芦醇干预组(HFD+RSV,RSV每天10mg/kg)?各组饲养共16周?1.2〓代谢参数的测量在给予不同的饮食喂养16周后,大鼠禁食过夜
5、(16h),经尾静脉采集血液样本?空腹血糖使用LIFESCAN单键超血糖仪(强生公司,美国)测定?空腹血清胰岛素使用超灵敏大鼠胰岛素ELISA试剂盒(MercodiaAB,瑞典乌普萨拉)测定?然后按照2g/kg的剂量腹腔注射葡萄糖溶液进行腹腔内糖耐量试验(IPGTT),分别于注射后0,15,30,60,90和120min测量血糖?1.3〓2-脱氧-3H葡萄糖的摄取分离得到比目鱼肌,迅速放入持续灌注体积分数95%O2和5%CO2的KRB缓冲液(pH7.4,8mmol/L葡萄糖)37℃孵育60min?随后,肌肉组织分别在有胰岛
6、素(100nmol/L)和无胰岛素的KRB缓冲液中孵育30min?接着使用KRB缓冲液冲洗肌肉组织,并在含有3.7×104Bq2-脱氧-3H葡萄糖的2mLKRB缓冲液中37℃孵育30min?取出组织,使用无同位素标记的KRB缓冲液冲洗,加1mmol/L的NaOH作用2h?使用放射性液体闪烁计数器测得CPM值?1.4〓免疫印迹将全细胞裂解液或质膜放入10%的SDS-PAGE中分离,并在含有200mL/L甲醇的Tris-甘氨酸缓冲液中转移至PVDF膜(Amersham),PVDF膜用TBST洗涤,10%脱脂牛奶封闭1h,并与一
7、抗(CAV-3,GLUT4和β-actin)孵育?之后用TBST缓冲液清洗PVDF膜,用耦合辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1h,并使用增强化学发光试剂盒(Amersham)显色?1.5统计分析运用SPSS13.0软件进行统计分析,数据均以平均值±标准差表示?采用单因素方差分析,组间多重比较使用SNK-T检验?检验水准α=0.05?2结果2.1〓白藜芦醇对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗起保护作用如图1A,B显示,经过16周的不同饮食,高脂饮食组相比正常饮食组,其空腹血糖和胰岛素浓度显著上升;而给予白藜芦醇后,明显抑制了血糖和胰岛素浓
8、度的上升?同时通过计算胰岛素敏感指数(ISI),ISI=l/(空腹血糖×空腹胰岛素),证实了ISI在高脂饮食组明显下降,补充白藜芦醇能逆转这种下降?此外,我们通过IPGTT试验表明,与正常饮食组相比,高脂饮食组注射葡萄糖30min血中的葡萄糖浓度明显升高,白藜芦醇处理组能明显降低注射葡萄糖60min后的
