黑色素瘤抗原a3致敏的树突状细胞对人肝癌细胞的体外杀伤作用论文

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1、黑色素瘤抗原A3致敏的树突状细胞对人肝癌细胞的体外杀伤作用论文肖刚石灵春谭敏张维彬杨海峰文剑明【摘要】【目的】观察经黑色素瘤抗原A3（melanomaantigengene，MAGEA3）致敏树突状细胞（dendriticcells，DCs）活化的淋巴细胞对人肝细胞肝癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）细胞的体外杀伤作用。【方法】采用粒—巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte/macrophagecolonystimulatingfactor，GMCSF）和白介素4（interleukin4，IL4）从人外周血中诱导树突状细胞，经MAGEA3抗

2、原致敏后与T淋巴细胞共培养，以淋巴细胞为效应细胞.freelelanomaantigengeneA3(MAGEA3)againsthumanhepatocellularcarcinoma(HCC)cells.【Methods】DCsacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)andinterleukin4(IL4)fromperipheralbloodmononuclearcells．AfterDCsphocytes，effectorcellsofcytotoxicTlymphocyte(CTLs)acelllineH4M(expressingM

3、AGEA3)andnormalhepatocytes(notexpressingMAGEA3)astargetcells，thecytotoxicityofCTLsuchhigherthanthatinnormalhepatocytesgroup（Ｐ＜００５）.【Conclusion】ThevaccineofDCssensitizedorspecificCTLactivityandpossessesaninvitrocytotoxiceffectonHCCcellline.Keyelanomaantigengene，MAGEA3）在多种肿瘤组织中表达，而且在肝细胞肝癌（hepat

4、ocellularcarcinoma，HCC）中也有较高频率的表达，但在正常组织中除胎盘和睾丸外均不表达［1］，因此在抗肿瘤免疫治疗中是理想的靶抗原。树突状细胞（dendriticcells，DCs）是体内唯一能激活初始型T细胞的专职抗原提呈细胞，DCs在诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫反应中具有特别重要的作用［2］。本研究中，我们以纯化的MAGEA3蛋白为抗原诱导DCs激发特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxicTlymphocyte，CTL）对HCC细胞进行体外杀伤试验，为临床应用MAGEA3开展针对HCC的免疫治疗提供实验依据。１材料与方法11质粒与细胞株含MAGEA3cDN

5、A的重组质粒pGEX4T1MAGEA3为本室自行构建。肝癌细胞株H4M及正常肝细胞株L02由中山大学第一附属医院病理科原代培养建株。12主要试剂RPMI1640培养基购自Gibcobrl公司；胎牛血清购自Hyclone公司；重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（rebinationhumangranulocyte/macrophagecolonystimulatingfactor,.freelaninterleukin4，rhIL4）、重组人白细胞介素2（rebinationhumaninterleukin4，rhIL2）、肿瘤坏死因子α（tumornecrosis

6、factorα，TNFα）均购自Perprotech公司；植物血凝素（phytohaemagglutinin，PHA）、二甲基亚砜（dimethy1sulfoxide，DMSO）、四甲基偶氮唑盐［3(45dimethylthiazol2y1)25diphenyltetrazoliumbromide，MTT］、淋巴细胞分离液Ficoll均购自上海生化试剂二厂；异硫氰酸荧光素（FITC）标记的小鼠抗人CD80、CD86单克隆抗体及藻红蛋白（PE）标记的小鼠抗人CD83、人类白细胞抗原DR（humanleucocyteantigenDR，HLADR）单克隆抗体均购自Ph

7、armingen公司；兔抗人MAGEA3多克隆抗体购自NeoMarkers公司。13MAGEA3蛋白的分离与纯化重组质粒pGEX4T1MAGEA3转化大肠杆菌BL21，经异丙基硫化βD半乳糖苷（isopropylthioβDgalactoside，IPTG）诱导表达。取1000?mL诱导表达的菌液，10000?g、4℃离心5?min；菌体沉淀用50?mL磷酸盐缓冲液（phosphatebuffe