羟丁酸脱氢酶(hbdh) 紫外动力法

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1、项目羟丁酸脱氢酶（HBDH）方法紫外动力法目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3.试剂3.1试剂3.2校准血清3.3试剂、校准血清的稳定性4.仪器5.操作6.计算7.操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8.参考值9.临床意义附录A:参数1.检测原理NADH在340nm波长有最大吸收，NADH生成NAD+的速率与血清中α-HBDH的活性成正比。在340nm波长下测定NADH下降的速率，既吸光度下降

2、的速率，既可测出α-HBDH的活力。α-HBDHNADH+α-酮丁酸+H+----------------α-羟基丁酸+NAD+2．标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水

3、分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。3．试剂3.1试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司HBDH试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：组成R1:R2=5:1混

4、合后溶液的浓度R1:Tris缓冲液:50mmol/LPH=7.5α-酮丁酸3.3mmoll/L叠氮钠<0.1%R2:起动液NADH0.18mmol/L稳定剂3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3试剂、校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度低于1.0时，试剂按照失效处理

5、。多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。4．仪器KONELAB30型号仪器。性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。5．操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法，参数见后附附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6．计算ΔA/min×Vt×1000HBDH(U/L)=-----------------------------=ΔA/mi

6、n×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率；e——18.5摩尔吸光系数；Vt——反应液总体积（ml）；d——1比色杯光径（cm）；1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；7．操作性能7.1精密度：批内CV<2.1%，批间CV<3.33%。7.2准确度：检测结果的相对不准确度≤±10%。7.3灵敏度：羟丁酸脱氢酶浓度为：200U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.045～0.055。7.4可报告范围：血清与试剂用量之比为1:24时，测定上限为400U/L。7.5

7、特异性：测量值在给定值的90%-110％范围内。7.6干扰：内源性干扰物为Hb1000mg/ml、TG2000mg/ml、BIL30mg/ml、VitC300mg/ml对测试结果无明显影响。8．参考值74～140U/L。9．临床意义α-羟丁酸脱氢酶的活性定义为：当用α-酮丁酸作为底物时所获得的乳酸脱氢酶（LDH）的活性。LDH-1较其它同工酶对α-酮丁酸有更大的亲合力，因此当用α-酮丁酸作为底物时，含LDH-1多的组织如血清、心肌、红血球等就具有较高的活性，即α-HBDH活性高；而肝、骨胳肌等具

8、有较低的活性，即α-HBDH活性低。常用α-HBDH来测量血清中LDH-1的活性。α-HBDH与LDH、GOT、CK、CK-MB一起构成了心肌酶谱。附录A:参数