琥珀酸脱氢酶 大鼠琥珀酸脱氢酶(sdh)说明书

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1、琥珀酸脱氢酶大鼠琥珀酸脱氢酶(SDH)说明书大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠组织匀浆及相关液体样本中琥珀酸脱氢酶（SDH）的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）水平。用纯化的大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入琥珀酸脱氢酶（SDH），再与HRP标记琥珀酸脱氢酶（SDH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝

2、色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的琥珀酸脱氢酶（SDH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性浓度。14试剂盒组成：试剂盒组成说明书封板膜密封袋酶标包被板标准品：90µmol/L标准品稀释液酶标试剂样品稀释液显色剂A液显色剂B液终止液20倍浓缩洗涤液48孔配置1份2片（48）1个1×480.5ml×1瓶1.5ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶20ml×1瓶96孔配置1份2片（96）1个1×960.5ml×1

3、瓶1.5ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶30ml×1瓶保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.1

4、4尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PB

5、S，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.14标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100

6、µl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。（稀

7、释后各孔加样量都为50µl，浓度分别为60µmol/L，40µmol/L，20µmol/L，10µmol/L，5.0µmol/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30

8、秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.14洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避