jc病毒蛋白vp3原核表达载体的构建及诱导表达

《jc病毒蛋白vp3原核表达载体的构建及诱导表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、JC病毒蛋白VP3原核表达载体的构建及诱导表达作者：李小权，毛羽，郑铁龙，成军，张树林，王琦，李兴旺【摘要】目的构建JC病毒蛋白VP3原核表达载体，并观察其表达情况。方法通过聚合酶链式反应(PCR)获得VP3基因，将其连接到pGEMT载体，测序正确后插入至原核表达载体pET32a(+)中，转化BL21大肠杆菌，IPTG诱导，并通过十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)、Westernblot免疫印迹分析鉴定融合蛋白的表达情况。结果扩增获得VP3基因片段，成功构建了大肠杆菌原核表达JC病毒VP

2、3载体。经IPTG诱导，得到了分子质量为59ku的目的蛋白，Westernblot证实其具有良好的抗原性。结论本研究成功表达了VP3蛋白，对于研究VP3蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础。【关键词】JC病毒；VP3蛋白；原核表达ABSTRACT:ObjectiveToconstructproeukaryoticexpressivevectorofVP3geneofJCvirus,andobservetheexpressionofrecombinantprotein.MethodsTheDNAfragment

3、ofvp3wasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR),andclonedintopGEMTvector.Aftersequencing,thecorrectDNAfragmentwasinsertedintoinducibleproeukaryoticexpressivevectorpET932a(+)andtransformedintoE.coliBL21.TheproteinwasinducedwithIPTGandanalyzedwithsodiumdodec

4、ylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresisandWesternblothybridization.ResultsTheDNAfragmentofvp3wasamplifiedbyPCR.Theexpressivevectorwasconstructedsuccessfully.AfterinductionwithIPTG,recombinanttargetproteinwithMr59kuwasexpressed.Westernblotanalysisshowedtha

5、ttheproteinhadgoodantigenicity.ConclusionTherecombinantvp3genewasexpressedsuccessfully.TheseresultslaythefoundationforstudyingtheimmunogenicityandbionomicsofVP3protein.KEYWORDS:JCvirus;VP3protein;prokaryoticexpressionJC病毒属人类多瘤病毒，是一种机会感染性病原，在正常人群中其血清学阳性率高达80%

6、。1971年PADGETT等[1]首先在人类的一种神经胶质细胞脱髓鞘病变(进行性多灶性脑白质病，progressivemultifocallukoenphalapathy,9PML)患者的病灶中发现并分离出JC病毒，该病毒具有明显的嗜神经性特点,有致瘤性，而且与某些类型的脑瘤有关。目前普遍认为，儿童期的JC病毒的感染率可能高达65%，因为多无明显的症状，故不会引起人们的注意[2]。JC病毒具体的传播途径目前尚不清楚。大多数研究认为该病是经粪口途径传播的[3]，但是也有人认为其是母婴传播[4]。虽然多数人可能从幼

7、年已经开始感染该病原，但是只有免疫严重缺陷的患者发病，尤其是细胞免疫缺陷的患者[2]。研究发现，JC病毒编码包括VP3在内的有6种蛋白，但其功能尚不清楚[5]。为了进一步研究JC病毒的生物学功能，我们构建了JC病毒的VP3原核表达载体，观察重组VP3蛋白在大肠杆菌中的表达。1材料与方法1.1材料1.1.1材料菌株、载体、大肠杆菌DH5α、大肠埃希菌BL21及原核表达载体pET32a(+)为本室保存；扩增JC病毒VP3基因的材料人免疫缺陷病毒(HIV)感染者的脑脊液从本院获取；pGEMT载体购于Promega

8、公司。1.1.2主要试剂Taq酶购于鼎国生物公司；丙烯酰胺、N，N′亚甲双丙烯酰胺、T4DNA连接酶、IPTG购于Promega公司；玻璃奶回收试剂盒购自博大泰克公司；BamHⅠ、AvalⅠ购自TaKaRa(大连)公司；抗His单克隆抗体购自SantaCruz公司；HRP标记羊抗鼠IgG购自北京中杉金桥生物公司；化学发光底物购自Pierce公司；PVDF膜购自Millipore公司；