两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响

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1、两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响作者：罗伟琼　李沈容　邹翠贤　罗小珍　朱美玲【关键词】脐血　　【摘要】目的探讨不同离心条件下对脐血造血细胞回收率的影响。方法运用6%羟乙基淀粉（HES）沉降，二次离心法可离心脐血浓缩单个核细胞（MNC），此法具有不受标本体积大小的影响、无细菌污染的优点。结果通过分析两种离心方法发现制备MNC时，离心力与MNC回收率有密切关系。结论加大离心力可增加MNC的回收率。　　【关键词】脐血;造血细胞/单个核细胞;离心法;回收率　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofdifferentcent

2、rifugalmethodsonreturns-ratioofMononuclearcell（MNC）inumbilicalcordblood.MethodsAftersedimentatedwith6%hydroxyethylstarch（HES）,twocentrifugatingprocesseswasemployedtoseparateandconcentrateMNC,whichwasnotaffectedbyspecimenvolumeandnotpollutedbybacterium.ResultsTherewassignificantrelationship

3、betweendifferentcentrifugalforceandrecoveryrateofMNC.Conclusion6RecoveryrateofMNCwillincreasebyincreasingcentrifugalforce.　　【Keywords】fetalblood;mononuclearcell;centrifugation;retrievingrate　　造血干细胞移植（HSCT）已经成为迄今为止医治各种恶性血液病、肿瘤、遗传性疾病、重度放射病及重症联合免疫缺陷等顽症的最有效方法之一［1,2］，而采用脐血替代骨髓及外周血进行HSCT已成为近10年来

4、HSCT领域的最重大进展之一［2,3］。最初的脐血HSCT使用的均为未经分离的全血，这种全脐血移植虽然能减少造血干/祖细胞的损耗，但因含有大量的红细胞等成熟血细胞，不但给冷冻保存带来困难，同时还可能会给移植病人造成严重的不良后果。因此，对脐血库来讲，高效快速分离脐血造血细胞,对单个核细胞（MNC）进行分离浓缩,最大限度地降低其终体积显得尤为重要。这不仅涉及到尽量减低造血细胞的丢失问题，而且还牵涉到降低脐血库库容的成本问题。所以，探索出一种行之有效理想的分离方法就成了该领域研究的热点。为此，笔者做了一些探索，现报告如下。　　1材料与方法　　1.1材料与仪器66%羟乙基淀粉（H

5、ES）购自美国Dupontpharma公司;无菌、无热源，含有ACD保养液三联采血袋（长春泰尔茂医用器具公司）;落地式低温离心机（SORVALL-PC3Cplus）;血细胞计数仪：2%冰醋酸结晶紫染色，计数有核细胞数。　　1.2MNC的制备方法　　1.2.1脐血来源40份脐血均无菌，采自深圳市宝安区西乡人民医院妇产科，均为足月产，胎儿无窒息。供者均为身体健康、发育良好的非高龄产妇。　　1.2.2分离提取将采集的脐血留样1ml用计数仪将MNC计数。参照纽约脐血库操作规程［4］按6%HES∶脐血=1∶5的比例加入，并充分混匀10min,两次离心法。第一种方法以10℃430r/m

6、in离心6min做第一次离心；第二种方法以10℃460r/min离心6min做第一次离心；利用三联袋将上层富含MNC的血浆及少许RBC移入转移袋内，去除剩余的RBC，再次以10℃1300r/min离心12min。去除上层血浆获得脐血有核细胞悬液18~22ml，留样1ml计数MNC。　　2结果　　两种离心转速与离心时间见表1；两种离心方法制备MNC获得率的比较见表2。6　　表1－表2（略）　　3讨论　　脐血与骨髓及外周血相比有诸多优点［5~7］：富含更原始的造血细胞，增殖能力强；可进行HLA1~3个抗原不合的同胞或无关者的移植；单份脐血中的造血细胞量可满足65%的儿童（<

7、;35kg）、25%体重较轻（<50kg）成人患者的移植需要；来源丰富，采集过程简单，新生儿及产妇均无任何痛苦及不良反应。6　　从脐血中分离造血细胞是脐血库进行库存脐血干细胞的必备程序，鉴于每份脐血采集的容量有限，它所含的MNC的数量也是有限的，况且新的资料研究显示脐血移植的成功率与TNC、MNC的数量呈正相关［8］，因此脐血细胞分离的方法是建立高品质脐血库的关键技术之一；目前主要采用6%HES沉降离心法分离。根据脐血中各种成分密度不同，经不同离心力作用后可将血浆成分和血细胞成分中的红细胞、粒细胞、淋巴细胞及