消化系统疾病动物模型

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第八章消化系统疾病动物模型Theanimalmodelsofdigestivessystemdiseases10/21/20211任立群 第一节急性胃炎动物模型10/21/20212任立群 体重300g左右雄性Wistar大鼠。一、酸制剂诱发急性胃炎模型急性胃炎动物模型实验动物10/21/20213任立群 大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：（1）水杨酸制剂（如20mmol/L阿司匹林或水杨酸溶液）按100mg/kg体重灌胃；（2）10mmol/L的醋酸；（3）不同浓度的盐酸（1，10，100mmol/L）；（4）同种动物胆汁；（5）2mmol/L的牛磺胆酸；（6）15%的乙醇；（2）-（6）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃；急性胃炎动物模型操作方法10/21/20214任立群 4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变。胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层内见中性粒细胞浸润。急性胃炎动物模型结果病变10/21/20215任立群 碱性肠液倒流入胃，刺激胃黏膜可引起炎症，即胆汁反流性胃炎。常见于原发性或继发性幽门功能紊乱或胃切除术后。本法取上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大鼠胃内，使之对胃黏膜产生持续刺激，形成胃炎。二、胆汁反流性胃炎模型急性胃炎动物模型造模原理10/21/20216任立群 体重180~220g左右雄性Wistar大鼠。急性胃炎动物模型实验动物10/21/20217任立群 1.制备上部小肠液；2.大鼠禁食不禁水24h，灌胃给予受试药3h后，开腹结扎幽门，向胃内注入小肠液，2ml/只（正常对照组注入2ml生理盐水）。缝合腹壁，腹腔注射阿托品5mg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃黏膜损伤模型的形成；3.4h后腹腔注射戊巴比妥钠处死大鼠，开腹，结扎贲门，取出胃，沿胃大弯剪开。用滤纸吸干表面水分，立即称量胃重，以胃湿重/体重之比（胃系数）表示胃水肿程度。4.肉眼观察并计数整个胃黏膜出血点数，作为损伤指数。急性胃炎动物模型操作方法10/21/20218任立群 模型组动物胃系数和损伤指数明显增加，肉眼观察模型组胃黏膜充血、水肿，皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血点。急性胃炎动物模型结果10/21/20219任立群 10/21/202110任立群 第二节慢性胃炎动物模型10/21/202111任立群 体重200~250g雄性Wistar大鼠。一、胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型实验动物用人胆汁与甘油（v/v,1:1）的混合液灌胃，每周1次，每次4ml，连续灌胃10周后处死大鼠，切除全胃，用10%甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色和刀豆蛋白A异染，进行组织病理学检查，重点观察幽门腺和胃底腺的变化。操作方法慢性胃炎模型10/21/202112任立群 胃腺管全长（从黏膜表面到腺体底部的距离）、腺管圆柱部（从黏膜表面到刀豆蛋白A异染阳性部位的上缘）及颈黏液细胞（又称副细胞、刀豆蛋白异染阳性部位的长度）均明显增长，固有腺变小，这些改变以胃底部为显著，其程度与所用胆汁的量呈量效关系。结果慢性胃炎模型10/21/202113任立群 慢性胃炎模型二、同种或自身免疫法慢性胃炎模型操作方法用同种或自身的胃液（按4~5ml/kg体重取胃液浓缩50倍），或取胃粘膜的生理盐水匀浆与弗氏佐剂以1:1的比例制成乳剂，皮下注射进行免疫。隔15~30d再注射1次，可诱发胃粘膜炎症细胞浸润和萎缩性病变。结果同“胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型”。10/21/202114任立群 慢性萎缩性胃炎模型10/21/202115任立群 三、大鼠慢性萎缩性胃炎模型病因:酗酒、用药不当、饮食习惯不良、幽门螺杆菌感染、自身免疫。造模评价：组织病理学是评价造模成功的最主要指标，主要观察和测量胃黏膜厚度、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率等。10/21/202116任立群 造模方法综合法一胆汁（去氧胆酸钠）+热水+主动免疫综合法二去氧胆酸钠+热糊+主动免疫综合法三去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌氨水单因素法慢性胃炎模型10/21/202117任立群 综合法一采用胆汁或其主要成分去氧胆酸钠、热水、免疫损伤等复合刺激因素对胃黏膜进行较长时间的刺激，造成胃黏膜慢性损伤，胃黏膜营养代谢障碍，以致胃黏膜萎缩变薄，腺体减少，炎症细胞浸润和结缔组织增生而形成慢性萎缩性胃炎。造模机制慢性胃炎模型实验动物体重200~250g雄性Wistar大鼠。10/21/202118任立群 主动免疫:皮下注射佐剂抗原0.3ml，一个月后重复注射一次。（同种大鼠胃黏膜生理盐水组织匀浆与弗氏佐剂1：1乳液）胆汁灌胃:在进行第一次免疫的同时，采用无化脓性炎症病人的引流胆汁，按12.5ml/kg体重，每日一次，连续70d。热水灌胃:在胆汁灌胃的同日（间隔5h），灌胃给予50℃热水12.5ml/kg体重，每日1次，连续70d。操作方法慢性胃炎模型10/21/202119任立群 10/21/2021组织病理学检查药物疗效观察胃黏膜变薄，胃固有腺体减少，粘膜肌层增厚。阳性对照药可用维酶素，0.5mg/kg体重，或三九胃泰，2~4g/kg体重，灌胃给予。结果慢性胃炎模型胃黏膜pH值升高，胃黏膜血流量及胃黏膜电位差下降。生理性指标10/21/202120任立群 注意事项每日灌胃2次，时间长，要求灌胃操作技术熟练，避免不必要的损失。注意饲养、卫生环境。慢性胃炎模型10/21/202121任立群 综合法二应用去氧胆酸钠、热糊灌胃和免疫损伤的方法造成胃黏膜损伤，以致胃黏膜营养代谢障碍，最后形成慢性萎缩性胃炎。造模机制慢性胃炎模型实验动物体重180~220g雄性Wistar大鼠。10/21/202122任立群 饮用水:以0.2%去氧胆酸钠作为饮用水，连续90d。主动免疫:第1周和第5周，皮下注射佐剂抗原（同上）0.3ml。热糊灌胃:每隔1d灌胃给予55℃热糊10ml/kg体重，连续90d。操作方法慢性胃炎模型10/21/202123任立群 胃酸、胃蛋白酶测定检测指标组织病理学检查炎症分级0级：无炎症1级：在粘膜表层或底部有少量散在的白细胞2级：在粘膜各部分均有较多的炎细胞3级：粘膜内有聚集成堆的白细胞慢性胃炎模型10/21/202124任立群 粘膜病变以胃窦部及胃体部明显，表现为粘膜变薄，粘膜肌层增厚，炎细胞浸润及胃泌酸功能下降。结果慢性胃炎模型10/21/202125任立群 注意事项同“综合法一”；因去氧胆酸钠成本高，可以猪胆汁代替；阳性对照药可选维酶素，0.25~0.5g/kg体重。慢性胃炎模型10/21/202126任立群 综合法三采用去氧胆酸钠、酒精、氨水和吲哚美辛等因素对胃黏膜进行较长时间的刺激，造成胃黏膜慢性损伤，形成慢性萎缩性胃炎。造模机制慢性胃炎模型10/21/202127任立群 10/21/2021去氧胆酸钠模拟胃反流情况，胆酸可破坏胃黏膜细胞的脂蛋白层，引起粘膜炎症。各因素之作用高浓度酒精直接破坏胃黏膜屏障引起炎症。低浓度氨水慢性刺激胃黏膜，从而破坏胃黏膜屏障及胃黏膜防御功能。吲哚美辛抑制胃黏膜前列腺素合成酶，使胃黏膜内前列腺素合成减少，减弱细胞保护作用。慢性胃炎模型10/21/202128任立群 体重180~220gWistar大鼠。实验动物慢性胃炎模型10/21/202129任立群 120.5%去氧胆酸钠加热至55℃，每日8时灌胃60%酒精每周二、五8时空腹灌胃2mlA因素症状B因素造模4种因素340.1%氨水作为饮料自由饮用1%羧甲基纤维素钠配制的0.5mg/kg吲哚美辛混悬液每日8：30灌胃2mlC因素D因素慢性胃炎模型10/21/202130任立群 对大鼠施加上述四种因素。12周后，处死动物。过碘酸-希夫（PAS）染色操作方法注意事项氨水要新鲜配制。慢性胃炎模型10/21/202131任立群 氨水单因素法氨水是一种胃黏膜屏障破坏剂，大鼠长时间饮用低浓度氨水，对胃黏膜造成慢性损伤，从而破坏胃黏膜屏障及胃黏膜防御功能，使胃黏膜营养代谢障碍，导致胃粘膜萎缩。造模机制慢性胃炎模型10/21/202132任立群 体重200~220gWistar大鼠。实验动物慢性胃炎模型操作方法饮以0.02%氨水，同时每隔7d灌胃给予1%氨水1次，10ml/kg体重，连续90d，或每2d定时给予0.04%氨水1ml/100g体重1次，连续2周。10/21/202133任立群 34/20实验结束后，取胃，甲醛固定3d后，自胃体前、后壁及小弯部取材，常规石蜡切片，HE染色及PAS染色。同时测定下列指标：检测指标慢性胃炎模型10/21/202134任立群 检测指标1胃腺管长度2胃黏膜PAS染色阳性层厚度测量pH值测定43壁细胞计数慢性胃炎模型10/21/202135任立群 检测指标1胃腺管长度2胃黏膜PAS染色阳性层厚度测量pH值测定43壁细胞计数乌拉坦腹腔注射麻醉下开腹，在腺胃部开一个小口，将pH计玻璃电极插入胃内测量胃体部及幽门部胃黏膜表面pH值。慢性胃炎模型10/21/202136任立群 37/20结果胃体部胃黏膜腺体总长度、腺管腺部长度、表面上皮厚度均明显减少；胃黏膜PAS染色阳性层显著变薄；胃黏膜壁细胞数明显减少；胃黏膜表面pH值明显升高。慢性胃炎模型10/21/202137任立群 注意事项大鼠以成年雄性大鼠为佳，幼龄大鼠胃黏膜修复能力强，造模后其胃黏膜萎缩的程度较成年鼠轻。本法胃黏膜萎缩的程度较综合法轻，可加大氨水浓度和延长造模时间以加重病变。氨水具有挥发性，应隔日配制以保证其浓度。表面上皮细胞及其下的腺上皮能分泌中性糖蛋白，PAS反应阳性，颈粘液细胞亦呈阳性反应。慢性胃炎模型10/21/202138任立群 第三节急性胃溃疡动物模型10/21/202139任立群 溃疡病的病因致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药不合理应用、幽门螺杆菌感染等。防御因素：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因子和内生性前列腺素等。溃疡的形成主要由于防御因素和致溃疡因素的平衡失调所致。10/21/202140任立群 ①应激法②幽门结扎法③药物法④醋酸法常用的方法急性胃溃疡动物模型在抗溃疡药物药效学试验中，应激法、幽门结扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血平法和乙醇法可任选其一。乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松……10/21/202141任立群 ①应激法②幽门结扎法③药物法④醋酸法常用的方法急性胃溃疡动物模型治疗性给药——醋酸法复制的模型预防性给药——其他模型乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松……10/21/202142任立群 ①应激法②幽门结扎法③药物法④醋酸法常用的方法急性胃溃疡动物模型阳性对照药：H2受体拮抗药——西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等加强胃黏膜防御功能——甘珀酸，果胶铋，硫糖铝乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松……10/21/202143任立群 研究抗胃溃疡药物胃黏膜形态观察胃分泌试验胃黏膜血流量测量胃粘液测定抗炎镇痛试验抑制幽门螺杆菌试验等10/21/202144任立群 一、应激性胃溃疡模型10/21/202145任立群 应激刺激血管收缩胃运动亢进副交感神经-垂体-肾上腺系统兴奋性↑应激性溃疡胃酸、胃蛋白酶和胃泌素分泌↑胃黏膜缺血、缺氧和抵抗力↓交感神经兴奋性↑应激性胃溃疡模型造模机制10/21/202146任立群 应激刺激有那些?外伤休克感染过冷、过热心理创伤饥饿水浸束缚应激性胃溃疡模型10/21/202147任立群 体重160~180gWistar大鼠，雌雄不限。多用雌性。大鼠固定钢板或束缚笼；恒温水浴装置。应激性胃溃疡模型实验动物器材10/21/202148任立群 应激束缚笼应激性胃溃疡模型10/21/202149任立群 禁食（不禁水）24h，醚麻，将动物固定(笼或固定器)。待其清醒后垂直浸于18~20℃的恒温水浴槽中，水面浸至剑突水平。水浸泡7h后取出，处死动物，立即开腹检查。胃的固定及处理。应激性胃溃疡模型操作方法10/21/202150任立群 胃的固定及检查10/21/202151任立群 大鼠胃内、外面观10/21/202152任立群 禁食（不禁水）24h，醚麻，将动物固定(笼或固定器)。待其清醒后垂直浸于18~20℃的恒温水浴槽中，水面浸至剑突水平。水浸泡7h后取出，处死动物，立即开腹检查。胃的固定及处理。用10倍解剖显微镜测量每一个黏膜损伤的长度。给药方法动物预先灌胃给予受试药4d，末次给药后1h进行水浸应激试验。水浸应激7h后处死动物，测量溃疡指数。应激性胃溃疡模型操作方法10/21/202153任立群 水浸3h，胃黏膜即发生损伤；7~8h胃黏膜可出现多发性、出血性糜烂小点；20h胃黏膜病变相当严重，但溃疡改变不超过粘膜肌层，且以腺胃（含胃体和胃窦）为重。应激性溃疡在腺胃部沿血管走行分布，表面覆盖凝血块，去除凝血后可见深褐色条索状溃疡。应激性胃溃疡模型结果10/21/202154任立群 以长度、宽度、点数“记分”以淤血和长度记分溃疡程度的评定1.溃疡指数：应激性胃溃疡模型10/21/202155任立群 模型组溃疡指数－给药组溃疡指数溃疡抑制百分率＝×100%模型组溃疡指数２.根据溃疡指数推算：发生溃疡的动物数溃疡发生百分率＝×100%实验动物数应激性胃溃疡模型溃疡程度的评定10/21/202156任立群 1.水浸应激性胃溃疡发生率可达100%，重复性较好。中枢抑制剂、抗胆碱药、制酸药对其有明显对抗作用。尽管胃病变与人类消化性溃疡不同，但由于方法简单，结果可靠，迄今仍是研究抗溃疡药物的常用模型。2.水温应保持恒定。3.动物禁食期间，如自食粪便会影响实验结果。应激性胃溃疡模型模型评价与注意事项10/21/202157任立群 应激性胃溃疡模型模型评价与注意事项4.应激束缚笼的大小应与动物匹配，松紧度合适。5.雌性大鼠更易引起应激性溃疡。6.受试药物一般在应激前30~60min给予。雷尼替丁0.135g/kg体重西咪替丁（甲氰咪胍）1.0g/kg体重10/21/202158任立群 消化性溃疡病因及发病机制—ROBBINS《BASICPATHOLOGY》Therearetwokeyfactsaboutpathogenesisinpepticulcer.Oneismucosalexposuretogastricacidandpepsin.Second,thereisaverystrongcausalassociationwithHelicobacterpyloriinfection.10/21/202159任立群 消化性溃疡病因及发病机制1.胃酸和胃蛋白酶胃酸对胃黏膜起腐蚀作用胃蛋白酶在酸性环境中活性增强，对胃黏膜产生消化作用2.幽门螺旋杆菌（HP）HP可通过释放尿素酶分解尿素产生氨、分泌空泡形成细胞毒素、磷脂酶等，损伤上皮细胞产生炎症，长期作用可导致消化性溃疡的形成。10/21/202160任立群 二、幽门结扎法胃溃疡模型10/21/202161任立群 幽门结扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，损伤胃黏膜造成胃溃疡。成年大鼠，雄雌均可。幽门结扎法胃溃疡模型造模机制实验动物10/21/202162任立群 1.给药3天。实验前大鼠禁食(24h)不禁水。2.自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约2~3cm。在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露胃。3.在胃幽门与十二指肠连接处用结扎线将幽门结扎，注意勿将邻近的其他器官、血管结扎。同时经十二指肠给予受试药。缝合腹壁切口，用纱布包扎切口。幽门结扎法胃溃疡模型操作方法10/21/202163任立群 4.幽门结扎后，停止供水供食，术后18h处死大鼠，取胃固定、剖检。5.沿胃大弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展开，胃黏膜面向上用大头钉固定在蜡板上。6.用肉眼或放大镜观察胃黏膜面，记录每只动物产生的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃疡指数）及病变的情况。幽门结扎法胃溃疡模型10/21/202164任立群 病变程度的评价1—溃疡面积通过溃疡中心量取的最大纵径和横径S=π（d1/2）（d2/2）式中S为溃疡面积，d1为通过溃疡中心量取的最大纵径，d2为通过溃疡中心量取的最大横径。幽门结扎法胃溃疡模型10/21/202165任立群 病变程度的评价2—溃疡指数可计数前胃部溃疡面积，以其总和作为溃疡指数。幽门结扎法胃溃疡模型10/21/202166任立群 病变程度的评价3—溃疡程度（Okabe法）在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只鼠溃疡面积的总合分为5个等级作为溃疡指数：溃疡面积(mm2)：1-1213-2526-3738-50≥50mm2或穿孔溃疡指数:1级2级3级4级5级幽门结扎法胃溃疡模型10/21/202167任立群 模型组溃疡指数－给药组溃疡指数溃疡抑制百分率＝×100%模型组溃疡指数发生溃疡的动物数溃疡发生百分率＝×100%实验动物数病变程度的评价3—溃疡程度（Okabe法）幽门结扎法胃溃疡模型10/21/202168任立群 形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的前胃部（瘤胃），多为圆形或椭圆形。但病变较表浅，属于胃黏膜急性出血性糜烂，与人类胃溃疡的典型病变差距较大。结果幽门结扎法胃溃疡模型10/21/202169任立群 1.该模型是Shay等创立的模型，方法简单，溃疡发生快，发生率达97%，主要用于观察药物对溃疡形成的预防作用。幽门结扎法胃溃疡模型模型评价与注意事项2.原法规定大鼠禁食48~72h。一般经验是：体重小于180g，禁食24~48h，这样动物可以耐受手术；体重超过180g，禁食48~72h，可提高溃疡发生率。3.对笼具的要求。10/21/202170任立群 4.术中要求。幽门结扎法胃溃疡模型模型评价与注意事项5.观察药物对溃疡的影响时，动物应预先给药或同时给药，若粗制剂可采用灌胃给药，应确认胃内已排空后方能结扎幽门。粗制剂可在幽门结扎的同时采用十二指肠内注入给药较好。6.阳性对照药:灌胃给予西咪替丁（甲氰咪胍）1.0g/kg体重雷尼替丁0.135g/kg体重10/21/202171任立群 大鼠胃的解剖及幽门结扎法所致胃溃疡图10/21/202172任立群 10/21/202173任立群 三、乙醇诱发胃损伤模型10/21/202174任立群 1.减少胃黏膜中前列腺素、氨基己糖含量，降低胃黏膜血流量，减小胃黏膜跨膜电位差，破坏主细胞减少粘液分泌，以及引起胃黏膜微循环障碍等，从而破坏了胃黏膜屏障的完整性导致溃疡。2.细胞内钙超载和细胞凋亡。乙醇法致急性胃溃疡造模机制10/21/202175任立群 成年大鼠，性别不拘。大鼠禁食24h，不禁水。最后1次给予受试药后，灌服无水乙醇1ml/只。1h后开腹取胃，固定检查，以溃疡指数进行组间比较。乙醇法致急性胃溃疡实验动物操作步骤10/21/202176任立群 15min后即可造成明显的胃黏膜损伤，且时间越长损伤越严重。损伤主要表现为粘膜充血、水肿、细胞坏死，伴有糜烂、出血及纵行的条索状出血坏死。乙醇法致急性胃溃疡结果10/21/202177任立群 可以胃黏膜损伤长度的总和作为溃疡指数。也可参照下表进行评分，以评分总和确定损伤程度。粘膜损伤长度<1mm1～2mm2～3mm3～4mm评　　　分1234乙醇法致急性胃溃疡结果10/21/202178任立群 乙醇性胃溃疡的程度与乙醇的浓度成正比，一般乙醇浓度40％以上可引起胃黏膜明显损伤，80％以上时出现明显破溃、坏死。因此，制备胃溃疡模型时多采用75％以上浓度的乙醇或无水乙醇。也可用盐酸-乙醇(50%乙醇-O.15mmol／L盐酸)给大鼠灌胃(1ml/100mg)造成溃疡，称为酸乙醇性溃疡。乙醇法致急性胃溃疡注意事项10/21/202179任立群 四、利血平诱发胃溃疡模型10/21/202180任立群 诱发溃疡的主要机制包括：①减弱肾上腺素能神经功能，迷走神经兴奋性相对增高，使胃酸分泌增加，胃平滑肌及血管平滑肌收缩增强；②耗竭中枢及外周神经以及其它组织的多巴胺，使“多巴胺细胞保护作用减弱”；③减少胃黏膜中NO的含量，减弱胃黏膜的抗损伤能力。利血平法致急性胃溃疡造模机制利血平是外周交感神经阻滞药10/21/202181任立群 体重160~180g的Wistar大鼠，雄雌各半。禁食不禁水24h后，灌胃给予受试药后1h,方法1.皮下注射10mg/kg体重利血平方法2.腹腔注射5mg/kg体重利血平18h后颈椎脱位处死动物，开腹取胃。胃的固定和腺胃部溃疡计数方法同水浸应激法。利血平法致急性胃溃疡实验动物操作方法10/21/202182任立群 损伤主要发生在腺胃部，可呈条索状出血点、瘀血斑或糜烂灶。利血平法致急性胃溃疡结果10/21/202183任立群 １.利血平的剂量不宜过大，否则动物容易死亡。２.处死动物最佳取材时间可根据预试验结果确定。3.该模型的稳定性与动物体质、禁食时间、利血平剂量、室温等因素有关，应尽量控制条件。4.阳性药对照可以选用H2受体拮抗剂（灌胃）雷尼替丁0.135g/kg体重西咪替丁（甲氰咪胍）1.0g/kg体重利血平法致急性胃溃疡注意事项10/21/202184任立群 五、吲哚美辛诱发胃溃疡模型10/21/202185任立群 吲哚美辛，又名消炎痛，是一种非甾体抗炎药。大剂量吲哚美辛显著抑制环氧合酶活性，致使胃黏膜防御因素减弱而形成溃疡。环氧合酶是花生四烯酸合成前列腺素的关键限速酶。环氧合酶受抑制，可使胃黏膜生理性前列腺素E合成减少。前列腺素E通过增加粘液和碳酸氢盐分泌、促进粘膜血流增加、细胞保护等机制，在维持胃黏膜防御和修复功能中起重要作用。造模机制吲哚美辛致急性胃溃疡吲哚美辛环氧合酶前列腺素E10/21/202186任立群 体重160~180g大鼠，雌雄各半。大鼠禁食不禁水24h，皮下注射吲哚美辛20~30mg/kg体重；7h后处死动物，观察溃疡情况并测量溃疡指数。阳性对照药可选雷尼替丁，灌胃给予。吲哚美辛粉用5%碳酸氢钠溶液配成10mg/ml，再用蒸馏水稀释成2mg/ml。此溶液为等张溶液，pH值7.5~8.0。实验动物操作方法吲哚美辛致急性胃溃疡10/21/202187任立群 溃疡主要位于腺胃部，表现为与长轴平行的线状、点状瘀血点。结果吲哚美辛致急性胃溃疡10/21/202188任立群 本模型胃溃疡发生率高，重复性好，缺点是溃疡比较表浅。胃损伤程度与动物体质、禁食时间、吲哚美辛剂量、给予后的时间等有关。观察药物的抗溃疡效果一般应预先给药，给药后30~60min再给吲哚美辛。可采用阿司匹林口服或腹腔注射（150mg/kg体重）复制类似的胃溃疡模型。模型评价与注意事项吲哚美辛致急性胃溃疡10/21/202189任立群 第四节慢性胃溃疡动物模型10/21/202190任立群 一、醋酸诱发慢性胃溃疡模型10/21/202191任立群 成年大鼠，体重180~200g，性别不限。醋酸诱发慢性胃溃疡造模机制实验动物在大鼠胃浆膜面浸渍或在浆膜下注射一定量的醋酸，由于醋酸的腐蚀作用使胃黏膜损伤而造成溃疡。醋酸浸渍法10/21/202192任立群 禁食不禁水24h，醚麻，开腹暴露胃。醋酸浸蚀的两种方法：1.醋酸注射法2.醋酸浆膜面浸渍法操作步骤醋酸诱发慢性胃溃疡10/21/202193任立群 慢性胃溃疡动物模型操作步骤1.醋酸注射法（1）用小号注射针在浆膜下注入30%醋酸0.03ml，缓慢拔出针头，勿使醋酸溢出。用生理盐水清洗胃壁创面，胃复位，关腹。（2）术后24h给予受试药。每天1次，连续给予10d。（3）术后11处死动物，取胃、固定、剖检。（4）观察并测量溃疡面积。10/21/202194任立群 慢性胃溃疡动物模型操作步骤2.醋酸浆膜面浸渍法（1）用直径5.5mm的圆形滤纸片蘸满冰醋酸，贴在腺胃部前壁浆膜面30s，同法重复1次。也可在腺胃部前壁的窦体交界处将内径5mm、长30mm的玻璃管垂直放置于浆膜面上，向管腔内加入冰醋酸0.2ml，使其接触浆膜面1.5min。（2）以生理盐水冲洗掉冰醋酸，胃复位，关腹。10/21/202195任立群 术后3~5天，可形成界限清楚的溃疡。溃疡一般呈圆形、椭圆形或不规则形，中心凹陷，四周微隆起，密布毛细血管。一般术后第5日，溃疡形成最为严重，以后缓慢愈合，但病变有反复。已愈合的溃疡，周围稍有隆起，表面红润，可见愈合的痕迹。结果醋酸诱发慢性胃溃疡10/21/202196任立群 模型评价醋酸诱发的胃溃疡是一种慢性溃疡模型，其特点是溃疡的形状、部位、肉眼及组织病理学形态、愈合过程均类似人类慢性胃溃疡。溃疡发生率高达100%，且溃疡持续时间长，自愈需60~100d，故可在较长时间内观察药物的治疗效果，因此，该模型是评价药物对溃疡愈合作用较为理想的模型。醋酸诱发慢性胃溃疡10/21/202197任立群 注意事项操作过程应严格消毒，笼具也应消毒，以免术后感染，影响药物的观察治疗。注射部位要求一致，必须将醋酸注入到浆膜下，发现有误者应弃去，以免影响结果。溃疡灶的大小与注射醋酸的量有关，醋酸的量要准确，否则形成的溃疡差异较大。醋酸诱发慢性胃溃疡10/21/202198任立群 大鼠慢性胃溃疡模型10/21/202199任立群 10/21/2021100任立群 形态观察：甲醛固定后测量溃疡面积，或用微量注射器注水测体积；与干预措施有关的检测：胃酸测定、胃蛋白酶消化力测定等。与屏障功能有关的指标：胃黏膜屏障功能测定、胃粘液测定等。与溃疡愈合质量有关的实验指标：前列腺素、表皮生长因子、aFGF水平及受体表达，热休克蛋白表达及免疫功能等。检测指标醋酸诱发慢性胃溃疡10/21/2021101任立群 二、幽门螺杆菌感染性胃溃疡模型10/21/2021102任立群 Hp含有大量尿素酶，能迅速分解食物中尿素并产生氨，氨中和胃酸使局部pH值增高，使细菌不被胃酸杀灭。Hp能分泌产生细胞毒素，引起细胞损伤，使细胞空泡化，导致胃黏膜完整性破坏，从而形成胃炎及胃、十二指肠溃疡。幽门螺杆菌胃溃疡造模机制10/21/2021103任立群 单纯给动物灌服一定量的Hp菌液，只能在感染动物的胃黏膜造成炎症反应，很少引起胃黏膜破损、溃疡。因此，多在动物胃溃疡模型的基础上，使动物感染Hp。常用动物有小鼠、大鼠、沙土鼠等。幽门螺杆菌胃溃疡10/21/2021104任立群 BALB/c小鼠：在胃大弯窦部粘膜挂上带有腐蚀性药物的棉线，造成胃溃疡，在此基础上感染幽门螺杆菌，加重病变程度。SD大鼠：先用热烙法复制胃溃疡，在此基础上灌胃给予Hp菌液。沙土鼠：动物禁食禁水1d，第2天灌胃给予50%乙醇0.3ml。之后继续禁食禁水，第2天灌胃给予HP菌液上、下午各1次，隔日上午再灌胃给予菌液1次。操作方法幽门螺杆菌胃溃疡10/21/2021105任立群 Hp定植检查感染后第4、8、12、和24周感染率均达100%。胃黏膜肉眼观察感染后第4、8周未见胃黏膜糜烂、出血和溃疡等病变。感染后第12、24周，约37%动物可见胃黏膜明显出血、慢性活动性胃炎及溃疡病变。组织病理学检查感染后第4周胃窦和幽门的黏膜层及固有层出现少量炎症细胞浸润，黏膜下层血管扩张、充血，腺体萎缩，伴有上皮细胞变性、坏死。随着时间的延长，炎症细胞浸润加重，可形成淋巴滤泡。高倍镜下，在胃窦部、幽门部及胃体部黏膜表层上皮细胞核胃腺窝中，可见大量Hp。结果幽门螺杆菌胃溃疡10/21/2021106任立群 应注意Hp菌的活性和浓度。由于多次灌胃给予，应避免其他细菌感染或抑制Hp定植。有人主张使用清洁级或SPF级动物，以防止胃内杂菌形成优势菌而掩盖了Hp菌生长。为便于资料间的比较，最好使用目前国际公认的HpNCTC11637菌株。注意事项BALB/c小鼠，SD大鼠幽门螺杆菌胃溃疡10/21/2021107任立群 蒙古沙土鼠胃内Hp值较人高，定居的杂菌较多，Hp不易定植。本模型先用一定量乙醇造成胃黏膜损伤，更有利于Hp定植和胃病变形成。CagA是Hp很重要的毒力因子，故本模型选用CagA阳性Hp。为减少沙土鼠胃内杂菌形成优势菌，有人主张用清洁级或SPF沙土鼠。注意事项沙土鼠幽门螺杆菌胃溃疡10/21/2021108任立群 第五节急性和慢性肝损伤动物模型10/21/2021109任立群 常用的肝损伤物质四氯化碳D-半乳糖胺硫代乙酰胺刀豆蛋白A10/21/2021110任立群 一、四氯化碳急性肝损伤模型10/21/2021111任立群 CCl4在肝内经NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用，生成活泼的三氯甲基自由基（CCl3•）和氯自由基（Cl3•）。这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合，引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化，导致膜结构和功能完整性的破坏，肝细胞损伤坏死；三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性，使Ca2+内流增加，从而引起细胞中毒死亡；三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键，损害线粒体使NADH及ATP在肝内生成减少，脂肪酸氧化受抑制，影响肝脏能量生成障碍，并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积。造模机制CCl4急性肝损伤模型10/21/2021112任立群 常用实验动物CCl4致急性肝损伤所需剂量和用法动物(CCl4)剂量用法形成肝损伤(ml/kg体重)所需时间0.5%10颈背部皮下注射1次约24h小鼠0.1%10腹腔注射1次约24h0.2%10于1、4、7日各灌胃1次末次后12~24h25%5皮下注射1次1~8d大鼠25%5皮下注射2次,间隔4日1~8d15%1每隔3日灌胃1次，共3次末次后16h家兔50%0.5皮下注射1次，共3次4~7d33%1.5隔日灌胃1次，共2次7dCCl4急性肝损伤模型10/21/2021113任立群 1.根据所用CCl4剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不同；2.一般在给予CCl4后16~24h血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性升高，并能反映肝损伤的程度；3.形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性。结果CCl4急性肝损伤模型10/21/2021114任立群 1.根据所用CCl4剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不同；2.一般在给予CCl4后16~24h血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性升高，并能反映肝损伤的程度；3.形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性。结果CCl4急性肝损伤模型10/21/2021115任立群 10/21/2021116任立群 10/21/2021117任立群 CCl4急性肝损伤模型10/21/2021118任立群 10/21/2021119任立群 1．CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型，造模方法简单，成功率高，重复性好，价格低廉。2．CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。3．CCl4是无色澄清的有毒液体，难溶于水，一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度。模型评价与注意事项CCl4急性肝损伤模型10/21/2021120任立群 四氯化碳的配制CCl4常配成乳剂使用，如需配成10%乳剂，可取5ml植物油和5g阿拉伯胶，放在乳钵中研匀，再加纯CCl410ml研匀，然后加蒸馏水10～15ml调成乳状，最后加蒸馏水使体积至100ml，用前摇匀。10/21/2021121任立群 4．用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是，不同动物个体肝损伤的程度差异较大。小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性不如大鼠好。5．CCl4可从呼吸道、皮肤吸收，对人体有毒性，注意防护。模型评价与注意事项CCl4急性肝损伤模型10/21/2021122任立群 二、D-半乳糖胺急性肝损伤模型10/21/2021123任立群 D-半乳糖胺是肝细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂，进入体内后与磷酸尿苷结合，形成磷酸尿苷-半乳糖胺复合物，致使磷酸尿苷耗竭，从而使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质的合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充，细胞器、生物膜受损、钙离子内流，从而造成肝细胞损伤。D-半乳糖胺引起细胞膜损伤可能与细胞膜中糖成分的改变有关，即己糖代替了中性糖介入细胞膜，导致膜分子结构发生变化。造模机制D-半乳糖胺急性肝损伤模型10/21/2021124任立群 一次性腹腔注射500~850mg/kg体重200~400mg/kg体重操作方法170~250gWisar大鼠D-半乳糖胺急性肝损伤模型2~24h出现不同程度的肝损伤剂量超过1000mg/kg体重常造成广泛性肝坏死或动物中毒死亡10/21/2021125任立群 一般于注射D-半乳糖胺后24~36h血清ALT、AST活性升高，血清胆红素总量增加，血清总蛋白和清蛋白含量明显降低，镜检可见肝细胞变性、坏死，组织化学显示肝细胞糖原和RNA减少，脂肪堆积。结果170~250gWisar大鼠D-半乳糖胺急性肝损伤模型10/21/2021126任立群 D-半乳糖胺与CCl4所致肝损伤的组织学改变明显不同。CCl4损伤主要表现在肝小叶中央静脉周围区大量肝细胞坏死和出血，脂肪变性十分明显；而D-半乳糖胺引起的损伤则呈弥漫性、多发性片状坏死，脂肪变性不如CCl4明显，细胞内有大量PAS染色阳性颗粒，嗜酸性小体较多见，与人类病毒性肝炎的肝损伤类似。方法简便，成功率高，重复性好，肝脏病变具特异性。因此，D-半乳糖胺肝损伤模型是目前公认的研究病毒性肝炎发病机制和药物治疗效果的较好模型。模型评价D-半乳糖胺急性肝损伤模型10/21/2021127任立群 三、硫代乙酰胺急性肝损伤模型10/21/2021128任立群 硫代乙酰胺可干扰RNA从细胞核到细胞质的转运过程，影响蛋白质的合成，也可能损害肝细胞膜，致使细胞的离子环境破坏，导致肝细胞坏死。造模机制硫代乙酰胺急性肝损伤模型10/21/2021129任立群 硫代乙酰胺，剂量一般按50~200mg/kg体重，腹腔注射。8~16h取血，测定血清ALT、AST活性。取一块肝组织测定细胞色素P450和糖原含量。另取一块肝组织做形态学检查。操作方法成年雄性Wistar大鼠或小鼠硫代乙酰胺急性肝损伤模型10/21/2021130任立群 小鼠腹腔注射16h后，血清ALT、AST活性显著升高，肝细胞中细胞色素P450和糖原含量明显降低。结果大鼠腹腔注射后6~8h，可出现肝小叶中心退行性改变，16h后出现肝细胞坏死，24~30h最为严重，36h开始恢复。硫代乙酰胺急性肝损伤模型10/21/2021131任立群 该模型可作为抗肝损伤药物的常规筛选模型，但不如CCl4和D-半乳糖胺模型普遍。雄性大鼠对硫代乙酰胺比雌性大鼠更敏感。长时间喂饲小剂量硫代乙酰胺可造成慢性肝损伤模型，也可在食物和饮水中加入一定量硫代乙酰胺，2周后出现肝细胞变性，甚至出现肝硬化或肝癌。模型评价与注意事项硫代乙酰胺急性肝损伤模型10/21/2021132任立群 四、刀豆蛋白A急性肝损伤模型10/21/2021133任立群 ConA是一种植物蛋白，是可活化T细胞的丝裂原。ConA进入小鼠体内后可引起与人类自身免疫性肝炎相似的肝损害。与ConA诱发肝损害相关因素：1.活化T淋巴细胞、巨噬细胞，促进细胞因子释放。如TNF-α、IL-2、IFN-γ等与早期肝细胞损害关系密切。2.其他如粘附分子、趋化因子、一氧化氮、肝细胞凋亡等也参与了ConA所致肝损伤的发病过程。造模机制ConA急性肝损伤模型10/21/2021134任立群 小鼠尾静脉注射ConA(10或29mg/kg体重，0.3ml/只)3h后，即见血浆ALT、AST开始升高，8h后升高明显，升高的趋势和速度与ConA剂量呈正相关。当给予ConA剂量为20mg/kg体重，2h后肉眼可见肝脏淤血、变暗，并逐渐加重，8h后逐渐减轻。光镜下可见肝内大量T淋巴细胞浸润，在门管区尤为明显，部分门管区淋巴细胞浸润呈“套袖”样改变，肝窦内红细胞淤积。注射后8h可见肝细胞核破裂和凋亡小体等，肝内有点状、片状肝细胞坏死，坏死区内见淋巴细胞浸润。结果ConA急性肝损伤模型10/21/2021135任立群 本模型是由淋巴细胞介导的肝损害模型，很好地模拟了人类病毒性肝炎、自身免疫性肝病等疾病，是研究这些肝病发病机制和治疗药物的较理想模型。ConA所致肝损害，无需预先致敏，一次性尾静脉注射后2h即可见肝细胞损害，8h肝损害达高峰，制作快速、简便。ConA致肝损害具有剂量依赖性，选用剂量0.15~30mg/kg体重时，肝损害程度随药物剂量加大而加重。当剂量达20mg/kg体重以上时，8h内出现小鼠死亡。病变具有肝脏特异性，ConA静脉注射后8h，组织病理学检查未发现肺、肾、脾、心等肝外器官损伤。模型评价ConA急性肝损伤模型10/21/2021136任立群 五、四氯化碳慢性肝损伤模型10/21/2021137任立群 四氯化碳反复多次给药，易造成慢性肝中毒，致使肝细胞变性、坏死及纤维组织增生，甚至发生肝硬化。造模机制CCl4慢性肝损伤模型10/21/2021138任立群 每周皮下注射递增浓度的CCl4（剂量为0.2ml/kg）1次，浓度由低向高逐渐增加，依次为5%、10%、20%和30%，每2~3周递增一个浓度，连续3个月。末次注射CCl448h后，测定血清ALT、AST活性、血清总蛋白、清蛋白及总羟脯氨酸含量。取出大鼠肝脏，称重，计算肝脏系数（g/100g），并对肝脏进行组织病理学检查。药物作用的观察多采用预防给药，即从注射CCl4之前3~4d开始，每日1次，连续3个月。阳性对照药可用联苯双酯0.15g/kg体重。操作方法130~150雄性Wisar大鼠CCl4慢性肝损伤模型10/21/2021139任立群 1．所用CCl4浓度开始不宜过高，否则易引起动物死亡；CCl4浓度增加的速度可根据动物状态掌握，当大部分动物状态不佳并出现死亡时，不应增加浓度。2．采用颈背部皮下注射CCl4，个别动物可出现局部炎症和硬结，因此应每日更换注射部位。注意事项CCl4慢性肝损伤模型10/21/2021140任立群 第六节肝纤维化和肝硬化动物模型10/21/2021141任立群 肝纤维化肝纤维化是指各种致肝脏损伤因素长期反复作用于肝脏，引起肝细胞变性、坏死和炎症，在修复过程中导致ECM异常增多和过度沉积的病理过程。肝纤维化的形成，主要是由于肝星状细胞激活，ECM成分生成过多，降解相对不足，胶原等ECM在肝内大量沉积所致。10/21/2021142任立群 病因与分类病毒性肝纤维化血吸虫性肝纤维化酒精性肝纤维化胆汁性肝纤维化代谢性肝纤维化中毒性肝纤维化营养不良性肝纤维化心源性肝纤维化四氯化碳诱发10/21/2021143任立群 肝纤维化与肝硬化的区别？10/21/2021144任立群 肝纤维化与肝硬化的区别？肝细胞弥漫性变性、坏死肝内纤维组织增生肝细胞结节状再生这三种病变反复交错进行肝内血循环改建假小叶形成肝硬化10/21/2021145任立群 一、四氯化碳肝纤维化肝硬化模型10/21/2021146任立群 如果长期反复多次给予CCl4，可导致肝内纤维增生，逐渐形成肝硬化。造模机制CCl4肝纤维化肝硬化模型10/21/2021147任立群 1．皮下注射40%~50%CCl4植物油溶液，首次5ml/kg体重，以后2ml/kg体重，每周2次，共10周。动物自由饮水进食。2．制备肝脏组织石蜡切片，HE和胶原纤维染色，进行病理学检查。操作方法CCl4肝纤维化肝硬化模型10/21/2021148任立群 该模型较为可靠，复制时间较短，肝纤维化进展稳定，适合于肝纤维化发生、发展过程的动态观察和研究，是目前国内外常采用的动物模型。模型评价CCl4肝纤维化肝硬化模型10/21/2021149任立群 第2周：肝小叶中央区出现片状肝细胞变性坏死，未见明显纤维组织增生。第4周：除肝细胞变性坏死外，肝内开始形成较薄的纤维间隔。第6周：肝脏纤维间隔进一步增厚，有假小叶形成。第8周：肝组织正常结构破坏，形成厚的纤维间隔，并分割形成假小叶。实验中大鼠成活率在60%左右。结果CCl4肝纤维化肝硬化模型10/21/2021150任立群 二、四氯化碳复合因素模型10/21/2021151任立群 采用皮下注射CCl4，喂饲玉米面、高脂、高胆固醇食物和饮用酒精等复合因素复制肝纤维化肝硬化模型。造模机制CCl4复合因素模型10/21/2021152任立群 玉米面蛋白质含量只能满足大鼠正常蛋白质需要量的一半，且缺乏色氨酸和蛋氨酸，这些氨基酸均属于趋脂物质，它们的缺乏会导致肝脂肪变，以致纤维化。胆固醇玉米面中胆碱含量低，饲料中加入胆固醇又增加机体对胆碱的需要量，酒精也增加对胆碱的需要量，从而加速肝脂肪变的发展。高脂高脂食物有利于形成肝细胞脂肪变性，脂肪变性的肝细胞对CCl4损伤作用敏感。酒精酒精能增强CCl4的毒性作用，可直接引起肝细胞线粒体损伤。CCl4复合因素模型10/21/2021153任立群 玉米面蛋白质含量只能满足大鼠正常蛋白质需要量的一半，且缺乏色氨酸和蛋氨酸，这些氨基酸均属于趋脂物质，它们的缺乏会导致肝脂肪变，以致纤维化。胆固醇玉米面中胆碱含量低，饲料中加入胆固醇又增加机体对胆碱的需要量，酒精也增加对胆碱的需要量，从而加速肝脂肪变的发展。高脂高脂食物有利于形成肝细胞脂肪变性，脂肪变性的肝细胞对CCl4损伤作用敏感。酒精酒精能增强CCl4的毒性作用，可直接引起肝细胞线粒体损伤。复合因素造成大量肝细胞坏死，肝网状支架塌陷，纤维组织增生，最后发展为肝硬化。CCl4复合因素模型10/21/2021154任立群 大鼠体重下降。第2周时肝细胞变性、坏死，表现为小叶中心出现小片状肝细胞气球样变、脂肪变性、坏死和间质轻微炎症反应，镜下未见明显纤维增生。血清ALT、AST活性升高，血清清蛋白含量减少，肝脏羟脯氨酸含量增加。第4周为纤维增生改变，除肝细胞变性坏死外，肝内开始有纤维间隔形成。第6周时为假小叶形成改变，肝脏纤维间隔进一步增宽，肝组织正常结构被破坏，有假小叶形成，导致肝硬化。结果CCl4复合因素模型10/21/2021155任立群 1．CCl4加高胆固醇和酒精饮食所致大鼠肝纤维化，是目前国内外常采用的动物模型。该模型可靠，复制时间较短，肝纤维化进展稳定，适合于肝纤维化、肝硬化发生发展过程的动态研究，是值得应用的一种模型。2．如果动物体重较前一次下降30%以上，可停止注射CCl41次，以减少动物死亡率。模型评价CCl4复合因素模型10/21/2021156任立群 参与肝纤维化的细胞???肝星状细胞库普弗细胞内皮细胞Pit细胞肝细胞10/21/2021157任立群 形态学观察：可使用各种胶原纤维染色，并可做图象分析；血清胶原代谢指标检测如PIIIP、HA、FN等。检测指标CCl4复合因素模型10/21/2021158任立群 三、苯巴比妥加速形成肝纤维化10/21/2021159任立群 细胞色素P450是肝微粒体内最重要的药物代谢酶类，苯巴比妥是细胞色素P450酶系的诱导物，能引起肝实质肿大和内质网增生。苯巴比妥能增加细胞色素P450的活性，加速CCl4向三氯甲基自由基转化，从而增加CCl4的肝毒性，加速肝纤维化形成，可缩短造模周期。造模机制苯巴比妥加速CCl4模型10/21/2021160任立群 体重100~150gWistar大鼠。大鼠饮用38mg/100ml苯巴比妥2周，待肝脏显著肿大后，以CCl4原液灌胃，开始剂量为0.02ml/100g体重，每5天给予1次，以后按体重调整CCl4用量。实验动物操作步骤苯巴比妥加速CCl4模型10/21/2021161任立群 给予CCl4后8~10周形成小结节型肝硬化，死亡率在40%左右；16~20周可复制肝硬化腹水模型，腹水成功率高达92.7%，但动物死亡率较高，有时达52.9%。结果苯巴比妥加速CCl4模型10/21/2021162任立群 CCl4加苯巴比妥能加速肝纤维化形成，缩短实验周期，是目前制备CCl4肝纤维化动物模型的较好方法。模型评价动物死亡率较高。苯巴比妥加速CCl4模型10/21/2021163任立群 坏死后性肝硬化10/21/2021164任立群 门脉性肝硬化（假小叶）灵长类肝小叶10/21/2021165任立群 坏死后肝硬化（假小叶）10/21/2021166任立群 A：正常肝小叶(Mallory染色)；B，C：肝硬化(Massontrichrome)10/21/2021167任立群 第九节胰腺炎动物模型10/21/2021168任立群 引起胰腺自身消化其他酶反应引起胰蛋白酶被激活的原因：（1）胆汁反流；（2）胰液分泌亢进；（3）病毒感染、外伤、药物等造成腺泡的损伤。胆汁和肠液中的肠激酶激活发病机制胰蛋白酶原胰蛋白酶10/21/2021169任立群 急性胰腺炎模型急性胰腺炎的主要表现为胰腺呈炎症水肿、出血和坏死。临床表现为突然发作的上腹部剧烈疼痛并可出现休克。急性胰腺炎10/21/2021170任立群 急性胰腺炎模型(一)牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法急性胰腺炎10/21/2021171任立群 早期牛磺胆酸钠可直接导致胰腺腺泡细胞或小导管壁的细胞溶解，进一步的损害可能是胆盐激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，产生腺泡自身消化。采用胰管逆行注射法诱发动物急性胰腺炎，是根据胰管、胆管共同通路和胆汁反流理论，模拟人类胆源性胰腺炎的发病机制造模机制急性胰腺炎10/21/2021172任立群 正常情况下主胰管的压力高于总胆管，胆汁不会进入胰管。但当胆总管阻塞时，胆道内的胆汁可被压入主胰管，引起急性胰腺炎。大鼠的胆管和胰管为共同开口的管道，解剖上称为胆胰管，从胆胰管上分出6~8支胰管的分支进入胰腺实质。生理解剖特点急性胰腺炎10/21/2021173任立群 大鼠实验前禁食不禁水12h，3%戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉。上腹正中切口进入腹腔，提起胃和十二指肠，显露出胰腺，辨认胆胰管走向，于肝门处用微型无损伤动脉夹夹闭胆总管，以防药液逆流进入肝脏。用4号钝针头朝胰腺方向穿刺十二指肠前壁，在其浆膜下潜行通过十二指肠乳头穿入胆胰管，用手指固定针头，缓慢（约2min）注入3.5%或5%牛磺胆酸钠溶液1ml/kg体重。300~350gWistar或SD大鼠操作方法3.5%或5%牛磺胆酸钠急性胰腺炎10/21/2021174任立群 4.另一种穿刺方法是，用4号针头紧贴胆胰管汇入十二指肠处，自肠外穿刺胆胰管。5.注射完毕拔除针头后继续按住穿刺处约1min。检查无漏胆，逐层关腹。6.假手术组仅翻动胰腺和十二指肠后关腹。7.术后15h处死动物，解剖时肉眼观察胰腺大体变化。取胰腺等组织，10%中性缓冲甲醛液固定，常规制备石蜡切片，在光镜下观察胰腺等脏器的改变。取血测定血清淀粉酶水平。操作方法急性胰腺炎10/21/2021175任立群 术后15h血清淀粉酶水平明显升高。肉眼观察，胰腺充血肿胀，包膜紧张，出现不同程度出血坏死，腹腔内可见血性腹水，胰腺周围大网膜和肠系膜出现淡黄色的皂化斑。胃肠道明显水肿，肾脏明显增大，颜色晦暗。光镜检查，于术后15h可见胰腺组织大片出血、凝固性坏死及脂肪坏死，坏死区之间有大量中性粒细胞和单核细胞浸润，表现为急性出血坏死性胰腺炎。结果急性胰腺炎10/21/2021176任立群 本模型在病因、发病机制及胰腺病变等方面与人类急性胰腺炎相似，是目前被公认的、比较常用的复制急性胰腺炎的方法。通过改变注射速度、注射持续时间、所用牛磺胆酸钠的浓度或剂量可控制胰腺病变的程度，操作简单，造模成功率较高，重复性较好，适合于评价药物对急性胰腺炎的防治效果。胰腺病变程度及动物死亡率与所用牛磺胆酸钠的浓度呈正相关，随着所用牛磺胆酸钠浓度的提高，胰腺损害逐渐加重。除胰管逆行注射牛磺胆酸钠外，还可注射自体胆汁、胆汁酸、胰酶等诱发急性胰腺炎。模型评价急性胰腺炎10/21/2021177任立群 急性胰腺炎模型(一)牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法（二）牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射法急性胰腺炎10/21/2021178任立群 急性胰腺炎模型(一)牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法（三）大剂量L-精氨酸分次腹腔注射法（二）牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射法急性胰腺炎10/21/2021179任立群 造模原理大剂量L-精氨酸能减少多胺的合成，抑制核酸和蛋白质的合成，而胰腺细胞的蛋白质合成最为活跃，故极易受损。与氧自由基及细胞因子的作用有关。急性胰腺炎10/21/2021180任立群 血尿淀粉酶、血清脂肪酶、淀粉同工酶等形态学生化：注射后12h，血清淀粉酶、脂肪酶明显升高，24h升高最明显，48h开始下降，72h接近正常。大体检查：注射后12h，胰腺轻度充血水肿；24h后充血水肿明显，48h胰腺出现坏死，胰腺周围脂肪皂化，伴有血性腹水；72h胰腺坏死明显，胰腺组织变薄。光镜检查：注射后12h，胰腺轻度充血水肿，24h明显充血，48h胰腺实质大片凝固性坏死，间质炎细胞浸润，72h胰腺组织模糊。指标检测结果急性胰腺炎10/21/2021181任立群 本模型制备方法简单，重复性小，损伤小，病变在各部位较一致，与人类急性坏死性胰腺炎在病程及病理改变相似，是研究急性胰腺炎发病机制和防治措施较为理想的模型。腹腔注射后，胰腺病变逐渐加重，其特点是胰腺组织的坏死十分明显，而出血少见。L-精氨酸的剂量十分关键，应先摸索剂量。当单次注射剂量大于400mg/100g体重时，动物多在数小时内死亡，而剂量小于400mg/100g体重时，胰腺病变不明显。用成年雄性昆明种小鼠分两次腹腔注射L-精氨酸，也可复制急性坏死性胰腺炎。模型评价与注意事项急性胰腺炎10/21/2021182任立群 急性胰腺炎模型(一)牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射法（三）大剂量L-精氨酸分次腹腔注射法（二）牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射法（四）超大剂量雨蛙素大鼠、小鼠模型（五）乙硫氨酸饮食法急性胰腺炎10/21/2021183任立群 10/21/2021184任立群 急性胰腺炎10/21/2021185任立群 10/21/2021186任立群 第十节胆石病动物模型10/21/2021187任立群 复习:概念结石胆结石胆管结石胆囊结石10/21/2021188任立群 胆红素+葡萄糖醛酸正常情况下酯类(非游离状态)分解游离胆红素钙+析出形成结石异常情况下(在胆道系统)发病机制细菌含有葡萄糖醛酸酶10/21/2021189任立群 色素性胆石胆固醇性结石10/21/2021190任立群 混合性胆石10/21/2021191任立群 复习:概念结石基本类型：色素性胆石-呈泥沙样及砂粒状；成分以胆红素为主，含少量胆固醇。胆固醇性结石-黄色或黄白色，表面光滑，剖面呈放射状。常为单个，体积较大，欧美多见。混合性胆石-呈多种颜色，我国最多见，结石多为多面体。大小数目不等。胆结石胆管结石胆囊结石10/21/2021192任立群 依据人类胆石形成的主要诱发因素，如胆汁理化状态的改变、胆汁淤滞、胆道感染、胆道异物、代谢因素等，采用单一或复合因素造模。胆石病模型10/21/2021193任立群 一、食饵性胆色素结石模型胆色素结石易发生于高碳水化合物膳食的人群，与正常人相比患者胆汁的磷脂明显增高。给豚鼠喂饲低蛋白饲料造成肝脏及胆汁中β-葡萄糖醛酸酶活性增高，促使结合胆红素水解为游离胆红素，与钙离子结合形成不溶于水的胆红素钙盐，形成结石。胆石病模型发病机制10/21/2021194任立群 豚鼠每日喂饲含2%酪蛋白、2%猪油、2%纤维素、3%蔗糖、0.04%胆酸及0.1%胆固醇饲料。一、食饵性胆色素结石模型胆石病模型操作方法健康成年豚鼠结果于喂养1.5~3个月胆囊内形成团块或凝块结石。胆石呈褐黄色或淡黄色，胆汁混浊且色深。10/21/2021195任立群 饲料配方中的胆酸和胆固醇是形成结石的关键。用体重350~450g雄性豚鼠，用含50%淀粉、15%葡萄糖、35%标准饲料喂养20d，造模成功率达94%。用体重140~160g地鼠，用含70%蔗糖、8.5%酪蛋白、5%麻油、5%混合盐、10%微晶纤维素、1%复合维生素和0.5%氯化胆碱的饲料喂养6周，造模成功率为80%。一、食饵性胆色素结石模型胆石病模型注意事项10/21/2021196任立群 二、感染性胆色素结石模型感染性胆色素结石的发病与胆道感染及胆汁瘀积有明显关系。感染是生石的首要因素，瘀积是生石的必要条件。胆石病模型10/21/2021197任立群 用一定量大肠杆菌注入胆总管引起感染时，大肠杆菌产生β-葡萄糖醛酸酶，可使水溶性胆红素水解为游离胆红素，后者与钙结合形成不溶性胆红素钙，在粘液物质的凝聚下形成胆色素结石而析出，加之胆总管被结扎，胆道阻塞，导致细菌繁殖加快并促使感染加重，可加速胆色素结石的形成。胆石病模型造模机制10/21/2021198任立群 用一定量大肠杆菌注入胆总管引起感染时，大肠杆菌产生β-葡萄糖醛酸酶，可使水溶性胆红素水解为游离胆红素，后者与钙结合形成不溶性胆红素钙，在粘液物质的凝聚下形成胆色素结石而析出，加之胆总管被结扎，胆道阻塞，导致细菌繁殖加快并促使感染加重，可加速胆色素结石的形成。胆石病模型造模机制10/21/2021199任立群 胆石病模型造模机制感染胆色素结石胆道阻塞向胆总管内注射0.1ml大肠杆菌菌液（1.5×106/ml）近肝门处结扎胆总管（3~8周后）10/21/2021200任立群 将人的同类型结石或蛔虫碎片或其他异物直接植入兔或犬的胆囊内，以此为核心，2~3个月后可诱发大量胆色素结石。脱落的胆道上皮细胞、细菌残体、蛔虫碎片、蛔虫卵等均可作为结石的核心，使之不断增大。三、异物植入性胆色素结石模型胆石病模型造模机制10/21/2021201任立群 被植入的结石应来自同一个人，并预先消毒、烘干至恒重，每只动物植入结石的重量、大小应一致，以备实验前后称重及测量比较。可做胆汁成分分析，并以此将动物均匀分组。手术时应尽量减少对胆囊组织的刺激，以免影响实验结果。三、异物植入性胆色素结石模型胆石病模型注意事项10/21/2021202任立群 四、体外溶石试验在模拟生理环境下，利用药液与胆石直接接触，观察药物对胆石的溶解作用。溶石原理胆石病模型10/21/2021203任立群 操作方法胆石标本制备取人的胆固醇或胆色素结石各1份，若干块。每类胆石需取自同一病例的多发结石，选择大小、形状相似和表面完整者，摄片、分析成分确定其类型，经烘干恒重后记录重量。溶石试验将各类胆石分别置于细孔尼龙网袋内，浸入盛有受试药物（溶石液）的磨口带塞试管中，室温静置，每日或间隔一定时间更换溶石液。记录溶液中有无碎石，并测定溶液中胆固醇、胆红素和钙的含量，以胆石消失的时间和重量变化等为判断指标。胆石病模型10/21/2021204任立群 第十一节溃疡性结肠炎动物模型10/21/2021205任立群 复制溃疡性结肠炎模型的方法：免疫诱发法用同种或异种动物的结肠粘膜匀浆、大肠杆菌为抗原，或以二硝基氯苯、三硝基苯磺酸为半抗原，致敏动物。化学损伤法醋酸、酒精、角叉菜胶、甲醛溶液、葡聚糖硫酸钠等造成肠粘膜及血管的损伤导致炎症。复合法采用几种因素联合的方式复制。10/21/2021206任立群 一、免疫诱发法实验动物造模原理用同种或异种动物的结肠粘膜作为抗原，致敏实验动物，引起机体免疫反应。成年Wistar大鼠。溃疡性结肠炎模型10/21/2021207任立群 操作方法1.制备抗原：取同种或异种动物的结肠粘膜，加入适量生理盐水制成匀浆，-20℃冷冻24h，冻融后3000r/min离心30min，取上清提纯，测蛋白含量，冰箱保存备用。2.免疫动物：使用时与弗氏完全佐剂制成1:1乳剂，大鼠足跖肉垫内注射0.1ml(2mg)。此后于10、17、24及31d分别在大鼠足跖、背部、腹股沟和腹腔内注射抗原4mg/只。溃疡性结肠炎模型10/21/2021208任立群 结果注射约10d后，在结肠内出现溃疡性改变，表现为黏膜上皮脱落、缺损、糜烂、腺体破坏、黏膜下水肿以及淋巴细胞、浆细胞和嗜酸性粒细胞浸润。30d左右，可见假息肉样的溃疡，此后逐渐演变为慢性化脓性病变，病程可持续1年。溃疡性结肠炎模型10/21/2021209任立群 模型评价本模型以溃疡性结肠炎病因为基础，临床表现和病理变化与人类溃疡性结肠炎基本符合。优点：成功率高、重复性好、病变持续时间长。缺点：造模时间较长；日龄＜21d或月龄＞9个月的大鼠不易诱发本模型。溃疡性结肠炎模型10/21/2021210任立群 二、二硝基氯苯诱发法造模原理2，4-二硝基氯苯（DNCB）是一种化学半抗原，与组织蛋白结合后，能诱导T细胞依赖性细胞介导的免疫反应。实验动物多次接触后，对其产生变态反应，从而引起结肠粘膜损伤。实验动物体重200~220g的Wistar大鼠，雌雄各半。溃疡性结肠炎模型10/21/2021211任立群 操作方法1.脱去大鼠背部被毛，每天滴2%DNCB-丙酮液（2gDNCB/100ml丙酮）1次，每次每只5滴，连续14d。2.第15d用直径3mm的导尿管经肛门向肠管内插入8cm，注入0.1%DNCB酒精液（1gDNCB/1000ml酒精）0.25ml，2d后处死动物，为急性溃疡性结肠炎；2~5周后为慢性表现。3.处死动物后立即取肛门上9~12cm肠段，进行病理学检查。溃疡性结肠炎模型10/21/2021212任立群 结果急性期表现为肠壁充血水肿，黏膜及粘膜下层大量中性粒细胞、淋巴细胞及其他炎性细胞浸润。黏膜坏死、溃疡形成，严重者可有黏膜脱落，有时可见隐窝囊肿。2~5周后为慢性期，表现为溃疡愈合，但黏膜隐窝紊乱或消失，杯状细胞减少，固有层及黏膜下纤维增生，慢性炎细胞浸润。溃疡性结肠炎模型10/21/2021213任立群 模型评价优点：操作简便，经济实用，重复性好，造模时间短。缺点：自愈性强，维持时间短。溃疡性结肠炎模型10/21/2021214任立群 三、三硝基苯磺酸诱发法造模原理三硝基苯磺酸（TNBS）是一种半抗原性物质，与组织蛋白结合后，使T淋巴细胞致敏，溶解与半抗原结合的动物自身细胞，使结肠粘膜发生炎症反应。此外，TNBS代谢产生的活性氧自由基也可损伤肠黏膜。实验动物体重200~220g的Wistar大鼠，雌雄各半。溃疡性结肠炎模型10/21/2021215任立群 操作方法1.大鼠禁食不禁水24h后，乙醚麻醉下用直径2m导尿管，经肛门插入8cm达结肠脾曲处，先用生理盐水清洗肠道，每只大鼠灌肠给予0.5mlTNBS酒精溶液。2.灌肠结束后，使动物保持平躺至自然清醒，动物自由饮食。3.分别于灌肠后3、14和21d处死动物，剖腹取远端结肠8cm，剪开肠管，生理盐水冲洗，黏膜面向上平铺固定于硬纸板上，10%甲醛固定。溃疡性结肠炎模型10/21/2021216任立群 结果1.模型动物精神倦怠，大便次数增加，并伴有稀薄黏液血性便。造模3d后症状达高峰，持续2周逐渐好转，21d时基本恢复正常。2.大体检查：造模3d后，结肠黏膜充血、水肿、糜烂、坏死，形成多处溃疡，肠管变窄。14d，上述改变出现好转。21d，结肠黏膜人可见叫明显的炎症和溃疡。3.显微镜检查：3d，溃疡形成可深达肌层，黏膜下出现大量炎性细胞浸润，有隐窝脓肿形成。14d，浸润的淋巴细胞增多，开始出现纤维组织和血管增生。21d，结肠呈慢性炎症改变，肉芽组织形成，纤维组织和血管增生更明显，黏膜腺体排列紊乱。溃疡性结肠炎模型10/21/2021217任立群 注意事项1.TNBS的剂量应控制在100mg/kg体重，当剂量过多时，肠粘膜损伤过重，难以用药物恢复。2.最近有人使用二硝基苯磺酸，采用同三硝基苯磺酸类似的方法复制溃疡性结肠炎模型。溃疡性结肠炎模型10/21/2021218任立群 四、大肠杆菌诱发法实验动物体重120~130gWistar大鼠。操作方法1.取健康大鼠结肠内容物，划线于伊红-美蓝平板，37℃培养24h，取典型菌落增菌并鉴定，确定为大肠杆菌后，备用。2.免疫前取菌扩增，用甲醛杀死细菌，制成1.2X108/ml细菌悬液。3.动物于1、10、17和24d分别注射不同部位进行免疫。溃疡性结肠炎模型10/21/2021219任立群 结果早期病理改变为黏膜水肿、炎细胞浸润剂血管炎性改变。约40d时黏膜内可见多处隐窝脓肿及溃疡形成，同时可见到细胞免疫功能下降和免疫复合物增加。溃疡性结肠炎模型10/21/2021220任立群 五、葡聚糖硫酸钠诱发法造模原理原理尚不明确，胃肠道并不吸收葡聚糖硫酸钠（DSS）。有人推测结肠局部的巨噬细胞吞噬葡聚糖硫酸钠后被激活，并释放胞浆内溶酶体酶，从而导致肠黏膜损伤；也有人认为葡聚糖硫酸钠可直接造成结肠黏膜及血管的损伤而引起炎症。溃疡性结肠炎模型10/21/2021221任立群 实验动物体重18~22gBALB/c小鼠，雌雄各半。操作方法小鼠自由引用3%DSS水溶液，给药后第1天起观察动物体重、大便等，10d后处死动物，取整个结肠进行组织病理学检查。溃疡性结肠炎模型10/21/2021222任立群 结果1.DSS给药后，动物体重下降，大便变稀，便潜血阳性或便血。2.结肠黏膜变薄，炎症细胞浸润，腺体及腺腔损伤或消失，可见溃疡及脓肿形成，但结肠各部的病变不均一。溃疡性结肠炎模型10/21/2021223任立群 补充大鼠，体重100~150g1.5%DSS水溶液自由引用，8周时处死动物。结果：结肠黏膜出现大溃疡及炎性息肉，近似人类慢性溃疡性结肠炎病变，是研究人类溃疡性结肠炎较为理想的模型，但大鼠的造模时间较长。溃疡性结肠炎模型10/21/2021224任立群 第十二节腹泻和便秘动物模型10/21/2021225任立群 腹泻动物模型腹泻类型：①渗出性腹泻由肠道炎症、溃疡、肿瘤浸润等引起的肠道粘膜完整性破坏，造成大量渗出而引起。②渗透性腹泻常见原因为消化不良、吸收不良和肠系膜淋巴管梗阻，使肠腔内渗透压升高。③分泌性腹泻由于胃肠道的水和电解质分泌过多。10/21/2021226任立群 常用腹泻模型:番泻叶、大黄诱发大肠性腹泻。蓖麻油诱发小肠性腹泻。多数研究同时采用两种腹泻模型，便于了解止泻药物的作用部位。腹泻动物模型10/21/2021227任立群 一、蓖麻油致腹泻模型造模原理蓖麻油十二指肠脂肪酶甘油蓖麻油酸皂化蓖麻油酸钠刺激小肠腹泻动物模型致泻时间：2~6h10/21/2021228任立群 实验动物成年小鼠，体重18~22g。操作方法1.小鼠禁食4h，每只灌服蓖麻油0.2~0.3ml，小鼠置于笼底垫有滤纸（或白色吸水纸）的单养笼内。观察一定时间内小鼠排出烂便及稀便的点数。2.在观察受试药物的止泻作用时，可预先给予受试药物一定时间后再灌服蓖麻油，也可先给蓖麻油再给受试药物。给予受试药物的观察时间一般为6~10h。腹泻动物模型10/21/2021229任立群 注意事项动物的周龄和体重应基本一致，试验前应观察动物粪便1~2d，有腹泻者弃去不用。2.如果拟观察药物的止泻作用，应根据给药途径的不同而决定动物是否需要禁食。3.所用笼底钢筛的网眼不能太密，应利于粪便漏到滤纸上。腹泻动物模型10/21/2021230任立群 二、大黄致腹泻模型造模原理大黄致泻的主要成分是蒽醌苷类。大黄口服后，大黄蒽醌苷部分被小肠吸收，在体内还原为蒽酚，再由结肠分泌至肠腔，刺激结肠，使其蠕动增加而致泻。未吸收的大黄进入大肠后，其中所含的番泻苷A由细菌分解未番泻苷元，也能使大肠蠕动增加。腹泻动物模型致泻时间：6~8h10/21/2021231任立群 实验动物体重18~22g小鼠。操作方法1.小鼠禁食4~6h，每只灌胃100%大黄水提液1ml。小鼠置于笼底垫有滤纸（或白色吸水纸）的单养笼内。观察一定时间内小鼠排出烂便及稀便的点数。2.也可采用大黄连续灌胃造成亚急性腹泻模型，一般造模5~10d，停止造模后给药治疗3~5d。腹泻动物模型10/21/2021232任立群 注意事项1.大黄的致泻机制基本清楚，造模成功率高，致泻较缓和。本模型的稳定性不如蓖麻油，但由于取材方便，方法简单，也是目前国内应用较多的一种模型。2.造模的关键因素是大黄制剂，其质量、煎煮时间、给药剂量等都会影响模型的稳定性。3.如果采用连续多天造模，大黄的剂量不宜过大，以免引发继发性便秘。腹泻动物模型10/21/2021233任立群 三、番泻叶致腹泻模型造模原理番泻叶的致泻成分主要是番泻苷A和B，可刺激大肠，使其蠕动增加而引起腹泻。实验动物体重18~22g小鼠。腹泻动物模型10/21/2021234任立群 操作方法1.番泻叶混悬液的制备取干燥的番泻叶片研磨成细末，加沸水研和，再加冷蒸馏水配成8%混悬液。2.一般先给予受试药物数次或数天，末次给受试药30min后，灌胃给予8%番泻叶混悬液2g/kg体重。3.灌服番泻叶后把小鼠置于单养笼内，笼底垫白色吸水纸或滤纸，记录灌服后1~6h内排出烂便或稀便的点数。腹泻动物模型10/21/2021235任立群 模型评价与注意事项造模方法简单易行，是目前国内应用较多的腹泻模型之一。2.番泻叶的刺激作用比大黄强，大剂量易引起肠道出血和炎症。腹泻动物模型10/21/2021236任立群 四、小肠推进试验试验原理腹泻与肠道功能紊乱有密切关系。止泻药物能通过调整肠运动功能而起到止泻作用。用含有色素的止泻药给动物灌服，观察一定时间内色素在肠道的推进距离，反映止泻药对肠道运动的影响。实验动物体重18~22g小鼠。腹泻动物模型10/21/2021237任立群 操作方法1.制备腹泻模型。2.实验前动物禁食24h，随机分为正常对照组、腹泻模型组和受试药物组。受试药物组给予受试药物与活性炭配制的混悬液，对照组和模型组给予生理盐水与活性炭配制的混悬液，活性炭（5%~10%生理盐水混悬液）的量为0.2ml/10g体重。3.给药后10~20min处死动物，取幽门以下的全部肠管，测量从幽门至回盲部之间的小肠全长，从幽门至炭末端作为活性炭的推进距离，计算推进率：腹泻动物模型10/21/2021238任立群 注意事项1.实验前动物的禁食时间必须一致。2.受试药物和对照组活性炭混悬液的灌胃体积及粘稠度必须一致。3.活性炭可用阿拉伯胶配置成5%~10%混悬液。活性炭也可用印度墨汁代替。4.动物处死时间可通过预实验确定，但整个实验必须保持严格一致。5.小肠推进试验也可用来观察便秘治疗药物的疗效。腹泻动物模型10/21/2021239任立群 五、功能亢进小肠推进试验试验原理腹泻时常有肠蠕动加快、运动亢进。利用新斯的明诱发小肠运动亢进，观察止泻药物对肠运动亢进的抑制效果。实验动物体重18~22g小鼠。腹泻动物模型10/21/2021240任立群 操作方法1.活性炭用生理盐水配置成5%~10%混悬液。2.实验前动物禁食24h，腹腔注射新斯的明0.1mg/kg体重（或灌胃给予新斯的明2mg/kg体重），给予新斯的明20min后，给予受试药物（具体过程同“小肠推进实验”）。3.计算活性炭推进率。腹泻动物模型10/21/2021241任立群 便秘动物模型便秘：7d内排便次数少于2~3次有功能性便秘、器质性便秘、弛缓性便秘和痉挛性便秘之分。常见原因有胃肠道内容物运动速度减慢、胃肠道梗阻、结肠应激性降低、肠道平滑肌张力减低、精神过度紧张或抑郁等。阳性对照药可选中药，如麻仁丸、便秘通等；西药可用硫酸镁、液体石蜡等。10/21/2021242任立群 一、禁水小鼠便秘模型造模原理动物禁水不禁食，引起体液减少和肠道水分缺失，导致粪便形成时因缺少水分而干结。实验动物体重18~22g小鼠。便秘动物模型10/21/2021243任立群 操作方法1.小鼠禁水不禁食，仅用大米连续喂养2~3d。小鼠外观瘦小，体重下降，尿色深黄，大便减少，粪便干结成珠状，说明造模成功。2.评价受试药物一般在造模2~3d后进行。药物治疗前禁食禁水12h，给予的药液和水中均加入2%墨汁。3.给药后小鼠置于铺有吸水纸的钟罩内，连续观察4h。记录第1次排便的时间、粪便颗粒数，称量干粪重量。便秘动物模型10/21/2021244任立群 注意事项1.优点：简单易行，成功率高。缺点：会出现粪便全无的现象，由于长时间缺水，影响动物正常生理活动。2.造模时禁水不禁食的时间可选7d。给药前禁食又禁水的时间可选72h。便秘动物模型10/21/2021245任立群 二、复方地芬诺酯小鼠便秘模型造模原理地芬诺酯系哌替啶的衍生物，能加强肠张力，抑制肠蠕动，增加肠节段性收缩，使肠内容物通过延迟，从而使肠内水分吸收增加而使粪便干结。实验动物体重18~22g小鼠。便秘动物模型10/21/2021246任立群 操作方法1.小鼠禁食不禁水12h后，灌胃给予地芬诺酯40~50mg/kg体重，动物即可出现粪便粒数减少，排便时间延长的现象。2.在造模30~60min后给予受试药物，观察给药12h内动物排出的干粪点数、稀粪点数和不排便动物数。便秘动物模型10/21/2021247任立群 注意事项1.此模型属非特异性便秘模型，与禁水便秘模型相比，由于采用一次给药造模，不影响动物的正常生理功能，与临床便秘相似，因此常用于治疗便秘药物的评价。2.地芬诺酯的剂量可根据预实验结果调整，以给药后小鼠无稀便、干粪点数少于正常组和70%动物不排便为标准。便秘动物模型10/21/2021248任立群 三、碱式碳酸铋大鼠便秘模型造模原理利用碱式碳酸铋的收敛和积坠作用造成大便干结并在结肠内滞留，使大鼠便秘。实验动物体重180~200g大鼠。便秘动物模型10/21/2021249任立群 操作方法大鼠灌胃给予75%碱式碳酸铋水糊状液2.0ml。每天2次，连续4d，第5d灌水。结果第6天处死动物，解剖可见大鼠结肠高度扩张，肠腔内可见成形较干粪块积滞，肠道轻度扩张。模型评价接近于中医临床燥屎内结、阻塞大肠、腑气不通、肺气上逆模型。便秘动物模型10/21/2021250任立群 10/21/2021251任立群 10/21/2021252任立群 六、恶唑酮诱发法造模原理该模型的造模机制尚不十分清楚。恶唑酮是一种半抗原，所诱发的结肠炎是一种IL-4介导的Th2型炎症。实验动物体重25~30gBALB/c小鼠，雌雄各半。溃疡性结肠炎模型10/21/2021253任立群 操作方法1.小鼠背部脱毛，在脱毛区涂3%恶唑酮酒精溶液0.2ml，次日重复涂抹1次。2.5d后将直径2mm的导尿管经肛门插入约4cm，注入1%恶唑酮酒精溶液0.15ml。灌肠后1、3、7、14及21d处死动物。溃疡性结肠炎模型10/21/2021254任立群 结果1.造模动物涂抹恶唑酮2d后，涂抹部位红肿，部分动物出现皮肤破溃。2.模型动物灌肠后，第1天即出现腹泻，第3~4天腹泻达高峰，部分动物出现血便。腹泻持续1周后渐转为软便，2周后大便基本恢复正常。3.模型小鼠灌肠后第1天出现远端结肠黏膜充血水肿，镜下可见黏膜上皮细胞脱落，浅表溃疡形成，杯状细胞和腺体减少，炎症局限于黏膜和黏膜下层，固有层可见多种炎症细胞浸润。结肠炎症可持续2周左右。溃疡性结肠炎模型10/21/2021255任立群 模型评价1.操作简单，重复性好，炎症可持续2周左右，有利于观察药物疗效。2.恶唑酮和三硝基苯磺酸同为半抗原，但二者所致结肠炎有明显不同。恶唑酮结肠炎以远端结肠病变为主，呈连续分布，炎症局限于黏膜和黏膜下层，以水肿、溃疡和混合性炎症细胞浸润为特征。溃疡性结肠炎模型10/21/2021256任立群 七、二硝基氯苯-醋酸复合法造模原理多种因素联合损伤结肠黏膜，造成溃疡性结肠炎病变。实验动物体重250~350gWistar大鼠，雌雄各半。溃疡性结肠炎模型10/21/2021257任立群 操作方法1.大鼠背部脱毛，每天滴2%二硝基氯苯丙酮液1次，每次每只5滴，连续14d。2.第15d用直径3mm导尿管经肛门插入8cm，注入0.1%二硝基氯苯酒精液0.25ml。3.第16d再次灌肠给予8%醋酸溶液2ml，准确定时15s后，用5ml生理盐水冲洗。溃疡性结肠炎模型10/21/2021258任立群 结果造模后1~2周，动物精神萎靡，体重下降，大便稀或出现黏液血便，可持续16周以上，并出现典型的溃疡性结肠炎病理改变。2~5周后转为慢性表现。溃疡性结肠炎模型10/21/2021259任立群 模型评价1.操作简便，成功率高，病程较长，病理改变与人类相似。2.克服了单独使用二硝基氯苯法病程短、自愈性强的缺点，也克服了酒精法缺少免疫反应的不足，是一种较理想的模型。溃疡性结肠炎模型10/21/2021260任立群