生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2,4—二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝

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1、实验6丙氨酸转氨酶(A1aninetransaminase,ALT)活性测定ALT:AlaninetransaminaseGTP:Glutamatepyruvatetransaminase一、目的要求了解血清ALT的测定原理及意义。二、实验原理基质液中丙氨酸和α—酮戊二酸在一定温度和时间内，经血清中ALT的作用，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2,4—二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显红棕色。根据显色的深浅反映出血清中ALT活性的强弱。其反应式如下：α－ketoglutaratepyruvicacidGlutamicacidpyruvicacidAlanineALT红棕色三、操作

2、步骤取4只小试管按下表加入试剂：标准管(D1)标准空白(D2)测定管(D3)测定空白(D4)丙酮酸标准液(100μg/ml)0.1000血清000.10.1基质液*0.50.50.50PH7.4磷酸盐缓冲液00.100置于37℃水浴或温箱中30min后取出2.4-二硝基苯肼0.50.50.50.5基质液(mL)0000.5ALT活性测定试剂加入方法Control210μgpyruvateα－ketoglutarateOD1Control110μgpyruvateOD1-OD2α－ketoglutarateOD2D2XμgpyruvateserumOD3D1XμgpyruvateOD3-OD4s

3、erumOD4OD1-OD2OD3-OD410μgXμg＝OD1-OD2OD3-OD410X(μg)＝×四、结果与计算本法所规定的ALT活性单位的定义是：1ml血清在37℃水浴中保温30min，与基质液作用后产生2.5µg丙酮酸，称为一个ALT单位。计算时，须先算出0.1ml血清于37℃下所产生丙酮酸的微克数,公式(1)。再根据其单位定义换算为每毫升血清内ALT活力单位,公式(2)。OD1-OD2OD3-OD410X(μg)＝×ALTunitspermillilitreserum=pyruvicacid(µg)2.5×10.1本法ALT正常值为2~40活力单位。五、应用意义ALT广泛存在于组织

4、细胞中，肝中特多。当肝细胞损伤时，此酶即释放入血，血中酶活性大大升高。临床上常用来测定肝功能。ALT显著增高见于各种肝炎急性期及药物中毒性肝细胞损坏。