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1、注射用重组人白介素—4外源DNA残留量的检测摘要目的检测本实验室生产制备的重组人白介素—4原液中外源DNA的残留量方法提取大肠杆菌基因组DNA，经过酶切变性处理后，加入地高辛标记探针，再用探针进行杂交实验。结果包括DNA纯度及浓度检测、基因组DNA酶切效率的检测、探针标记效率的检测、杂交的免疫检测，显示五个结果均正常。结论供试品（注射用人重组白介素—4原液）中外源DNA的含量小于0.1ng/μL，本批次产品合格。关键词白细胞介素—4外源DNA残留DIG探针标记locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedo
2、ntheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame17DetectionofexogenousresiduesDNAfromInjectiveRecombinantHumanIL-4AbstractObjectiveDetecttheexogenousDNAinhumanrecombinantinterleukin-4concentra
3、teresidueswhichproducedbyourownlab.MethodExtractE.coil’sgenomeDNA,dealwiththeenzymedenaturation,addtagsdigoxinprobe,probehybridizationexperiments.Testresultsincludingfive:DNApurityandconcentration,genomicDNAenzymeefficiencyofdetection,probedetection,theefficiencyofhybridizationofimmunede
4、tection,experimentshowsfiveresultswerenormal.ConclusionThetestshowsthatthesamples(concentrate)employingrecombinantinterleukin-4injectionofexogenousDNAcontentislessthan0.1ng/muL,sothisbatchproductisqualified.KeywordInterleukin-4theexogenousresiduesDNADIGlabeledprobelocatedintheTomb,DongSh
5、enJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame17前言基因工程药物中宿主细胞残余DNA对人体可能造成插入突变，导致抑癌基因失活，癌基因被激活等严重危害，外源大肠埃希氏菌DNA进入人体后,可能导致肿瘤的发生[1]，因而对基因工程药物中外源DNA的控制具有重要意义。注射用
6、重组人白介素—4中外源DNA经变性为单链后，吸附于固相尼龙膜上，在一定温度下可与相匹配的单链DNA复性而重新结合成双链DNA，称为杂交[2]，应用DNA杂交技术，将特异性单链DNA经地高辛（DIG）探针标记后，与吸附在尼龙膜上的注射用重组人白介素—4单链DNA杂交，加入碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体与地高辛标记的探针相结合，再加入碱性磷酸酶的作用底物CSPD，通过相应的显示系统显示杂交结果，与已知含量的阳性DNA对照比对后，可测注射用重组人白介素—4中外源DNA残留量[4]。目前，基因工程药物在攻克肿瘤、心血管系统等一些疑难病症等领域，发挥着巨大的作用[8]。本实验室生产
7、的注射用重组人白介素—4，采用大肠杆菌作为工程菌，提取pET32a(+)载体与pUC18/mIL24质粒,用限制性内切酶NdeI酶切得到带有互补粘性末端的载体和目的基因片段,用T4DNA连接酶连接后转入JM109中,涂布在加有氨卞青霉素的固体LB培养基上,培养过夜[11]。挑取阳性菌落，经质粒酶切验证、DNA测序，确认质粒构建正确且无突变后,转入大肠杆菌BL21感受态细胞,从而获得pET32/rmIL24质粒的BL21(DE3)表达工程菌。控制相关条件促使人的白介素-4基因（目的基因）表达，生产重组蛋白药物人白介素—4（约15KD）。经目
