维生素d受体基因多态性与慢性乙型肝炎患者的关联研究

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1、描述：目的：探讨维生素D受体（VDR）FokⅠ基因多态性与慢性乙型肝炎患者临床表型的关联。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）技术检测VDRFokⅠ基因的多态性在44例慢...　　【摘要】 目的：探讨维生素D受体（VDR）FokⅠ基因多态性与慢性乙型肝炎患者临床表型的关联。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）技术检测VDRFokⅠ基因的多态性在44例慢性乙型肝炎重度患者、46例中度患者和40例非活动性HBsAg携带者中的分布，并进行基因型分析。结果

2、：慢性乙型肝炎重度组、慢性乙型肝炎中度组VDRFokⅠ基因的基因型与对照组（非活动性HBsAg携带者）比较差异有统计学意义（P<0.01）；慢性乙型肝炎重度组、中度组与对照组VDRFokⅠ基因酶切位点的等位基因F/f分布存差异有统计学意义（P<0.01）。Pearson列联系数=0.53，提示等位基因F/f分布与慢性乙型肝炎患者的不同临床表型存在相关性。慢性乙型肝炎重度组、中度组f等位基因分布频率高于对照组。结论：VDRFokⅠ基因的多态性与慢性乙型肝炎患者的不同临床表型存在一定的关系。　　慢性乙型肝炎（CHB

3、）是以肝细胞损伤和肝组织炎性反应为主的疾病，乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝损伤及转归与机体的细胞免疫密切相关，主要以T淋巴细胞清除病毒和肝细胞的损伤为主。1，25-二羟维生素D3[1，25（OH）2D3]是维生素D3的活性形式。随着研究的深入，人们认识到它除了调节钙磷代谢外，还具有介导免疫反应作用，而这些功能的实现主要是由维生素D受体（vitaminDreceptor，VDR）来介导的。本研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）的方法，初步探讨VDR基因多态性与慢性乙型肝炎患者不同临床

4、表型的关系。　　1资料与方法　　1.1一般资料选取2013年5月-11月本院感染科住院的慢性乙型肝炎现症患者90例，其中重度患者44例，男26例，女18例，平均年龄（37.4±12.5）岁；中度患者46例，男29例，女17例，平均年龄（35.4±10.5）岁。对照组选择同期本院感染科住院和门诊的非活动性HBsAg携带者40例，其中男27例，女13例，平均年龄（32.5±9.2）岁，全部患者均为生活在本地区的汉族人群，无血缘关系。诊断标准参照“慢性乙型肝炎防治指南2010年更新版”，所有患者在3个月内未使用免疫调

5、节剂和抗病毒药物，并排除合并其他病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化及肝癌等。全部患者均自愿参加本次研究。三组研究对象一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。　　1.2方法　　1.2.1实验室检查locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),w

6、hogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame肝功能相关指标，包括AST/ALT、血清总胆红素TBIL、凝血酶原活动度PTA、血清白蛋白；检测HBsAg、anti-HBs、HBeAg、anti-HBe和anti-HBc及HBV-DNA滴度。　　1.2.2基因组DNA的提取留取慢性乙型肝炎中度及重度患者和非活动性HBsAg携带者空腹12h后，晨起静脉采血4mL（EDTA抗凝），采用硅胶柱纯化方式，用血液DNA提取试剂盒（D3741-01美国OMEGA），从700?

7、L抗凝血液中提取淋巴细胞基因组DNA。利用UV计测定所提取的DNA浓度及纯度，并将其稀释至10ng/?L，分装保存于-20℃冰箱保存备用。　　1.2.3聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）VDRFokⅠ基因的引物序列：上游引物，5，-AGCTGGCCCTGGCACTGACTCTGCTCT-3；下游引物，5，-ATGGAAACACCTTGCTTCTTCTCCCTC-3。总反应体系均为25μL：1?L基因组DNA，2.5?L10×PCR缓冲液，上下游引物各0.5μL，dNTPs2?L，0.25

8、?LTaqDNA聚合酶，去离子水18.25?L。VDRFokⅠPCR扩增条件：95℃预变性4min；98℃变性10s，63℃退火30s，72℃延伸60s，共30个循环；72℃再延伸5min。取扩增的PCR产物0.5?L，1?L限制性内切酶FokⅠ，及2?L10×MBuffer，2?L0.1%BSA（由大连TaKaRa公司提供）及14.5?L灭菌水组成酶切总反应体系20?L，置于37℃水