乙酰肝素酶在大肠癌转移中作用的初步研究

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1、河北医科大学硕士学位论文乙酰肝素酶在大肠癌转移中作用的初步研究姓名：张娟申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：于跃明20070301中文摘要乙酰肝素酶在大肠癌转移中作用的初步研究摘要目的：大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升趋势。近年来，尽管手术、放疗、化疗等综合治疗使大肠癌的术后生存得到了很大的改善，但是疗效并不乐观。大肠癌患者早期常无明显症状，多数患者就诊时即已为中、晚期，还有15．35％就诊时就已经发生转移，而肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的重要原因之一。早在70年代末，人们就发现肿瘤转移可能与一类肝素样物质的作用有关，并对肝素在肿瘤转移中的作

2、用进行深入研究。80年代初期，乙酰肝素和乙酰肝素酶的发现为肿瘤转移研究开辟了新的领域。肿瘤侵袭转移必须突破细胞外基质(ECM)和血管内皮下基膜(BM)屏障，硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)是一种蛋白聚糖类碳水化合物，为广泛存在于有脊椎动物和无脊椎动物组织细胞外基质(ECM)和细胞表面的生物大分子，是基底膜的主要构成成分。乙酰肝素酶(Heparanase，HPA)是一种葡萄糖醛酸内切酶，也是目前发现的唯一可以降解HSPG的酶，它通过切断硫酸乙酰肝素蛋白多糖侧链(HS)以降解细胞外基质和血管基膜，并通过释放和活化HSPG结合型的生长因子(如bFGEVEGF等)诱导血管

3、生成，从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移。随着对HPA与肿瘤侵袭转移关系及HPA抑制剂的深入研究，HPA将成为抗肿瘤治疗的新靶点。本研究从基因和蛋白水平分别检测了HPA在大肠癌患中文摘要者的正常大肠粘膜组织、大肠癌原发灶、转移淋巴结和非转移淋巴结中的表达情况，并结合临床病理资料进行分析，以探讨HPA与大肠癌转移的关系。方法：l免疫组织化学法：采用sP法，按照试剂盒说明书进行操作，用l：60稀释的兔抗人HPA多克隆抗体分别检验各标本中HPA蛋白的表达情况，PBS代替一抗作为阴性对照。结合临床病理资料对其结果进行相关统计学分析。2半定量RT-PCR法：采用髓PCR法在相同条

4、件下扩增所取标本中HPA和内对照13-action的表达情况，测出HPA的表达水平(当HPA和13-action的比值大于0．5时为高表达，小于0．5时为低表达)，然后进行统计学分析。结果：免疫组化结果显示HPA蛋白在大肠癌患者正常大肠粘膜、大肠癌原发灶、非转移淋巴结和转移淋巴结的表达率分别为16．67％(8／481、68．75％(33／48)、5．71％(2／351、82．20％(37／45)。所取的48例大肠癌原发灶标本中有9例伴有同期肝脏转移，有13例经病理确诊为低分化腺癌，13例为中分化腺癌，22例为高分化腺癌。在4l例浆膜受侵的癌组织中有31例HPA表达

5、阳性，阳性率75．61％(3[／4t)。在7例浆膜内浸润的癌组织中，HPA阳性率28．57％(2／7)。HPA在高、中分化腺癌中的阳性表达率分别为45．45％和76．92％，在低分化腺癌中的表达率为53．85％。9例伴有同期肝脏转移的大肠癌组织中HPA均为阳性表达。经统计学分析可知，大肠癌原发灶中HPA的表达明显高于正常大肠粘膜(x2=23．04P<0．05)，具有统计学意义：转移淋巴结HPA表达阳性率显著高于非转移淋巴结(P<0．05)；有淋巴结转移的癌组织HPA表达明显高于无淋巴结转移N(P

6、I期(PO．05)。在RT-PCR所检测的40例大肠癌病人标本中，HPAmRNA在正常大肠粘膜，非转移淋巴结，大肠癌原发灶及转移淋巴结中的表达率分别为5％(2／40)、13．33％(2／15)、75％(30

7、／40)和78．13％(25／32)。所取40例标本经病理确诊有14例为高分化腺癌，有13例为低分化腺癌，13例为中分化腺癌，7例确诊同期伴有肝脏转移中，HPA的阳性表达率为85．71％(6／7)。在3l例浆膜受侵的癌组织中有28例HPA表达阳性，阳性率90．32％(28／311。在9例浆膜内浸润的癌组织中，HPA阳性率33．33％(3／9)。HPA在高、中分化腺癌中的阳性表达率分别为71．42％和76．92％，在低分化腺癌中的表达率为76．92％。其中HPA在大肠癌组织中的表达率明显高于正常粘膜(P<0．05)；有淋巴结转移组HPA表达明显高于无淋巴结转移组(P

8、