外源性upa在兔椎间盘退变中作用的初步研究

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1、石河子大学硕士学位论文外源性uPA在兔椎间盘退变中作用的初步研究姓名：杜文丙申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：刘维钢20100601摘要目的：通过向兔椎间盘内注射不同浓度外源性尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA），观察其对椎间盘的影响，探讨其在椎间盘退变发病过程中的可能作用。方法：健康6个月左右大白兔72只,2.5-3Kg，随机分为实验组48只，阴性对照组16只，空白对照组8只。实验组：分为三个亚组，采用腰椎侧前方倒八字入路暴露L4/5椎间盘，分别注射浓度为10、20、40ng/µl的uPA各1µl。阴性对照组（生理盐水组）：L4/5椎间盘内注射1µl的生理盐水。空

2、白对照组：不作任何处理。手术后分别于第3、6周处死相应各组大白兔取相应椎间盘,进行大体观察、HE染色、SABC法测基质金属蛋白酶-3（MMP-3）的表达及蛋白多糖含量测定。结果:（1）实验组光镜下观察随着时间和浓度增加，纤维环排列逐渐紊乱，髓核含水量逐渐减少，色泽也逐渐浑浊。生理盐水组椎间盘与空白对照组比较没有明显变化，都呈正常外观，纤维环排列整齐，髓核丰富，色泽透亮。HE染色显示：空白组椎间盘，纤维环仍保持着致密的板层结构，细胞成分较多,呈梭形纤维细胞样或呈软骨细胞样。各实验组随时间和浓度变化：髄核脊索细胞逐渐减少，并逐渐被纤维软骨组织替代，纤维环与髄核之间失去明显的界限。（2）

3、免疫组化MMP-3表达结果：三周时空白组和生理盐水组，MMP-3表达阳性率极低，其余实验组阳性率随浓度增加而增高，各实验组与对照组及实验组之间都有统计学意义（P<0.05）。六周时MMP-3表达，实验各组与对照组及实验各组之间比较有统计学意义（P<0.05），实验各浓度组与三周时相同浓度组比较也有明显统计学意义。（3）三周时盐水组蛋白多糖含量与空白组比较变化不大，各实验组与空白及盐水组比较降低明显（P<0.05）,六周时盐水组及实验组与空白对照组髓核蛋白多聚糖比较具有差异性（P<0.05），并且实验组蛋白多聚糖下降程度与uPA注射剂量及时间呈正相关(P<0.05)。结论:（1）uP

4、A作为一种细胞外基质的降解酶系，可激活体内基质降解系统MMP-3，从而共同促进软骨降解，椎间盘退变。（2）uPA椎间盘内注射能造成椎间盘的退变，方法简便，所用时间短，可作为一种较为理想的椎间盘退变动物模型。关键词：uPA；椎间盘；蛋白多糖；基质金属蛋白酶-3；兔论文类型：A(基础研究)IAbstractObjective:Toobservetheeffectsofdifferentconcentrationexogenousurokinase-typeplasminogenactivator(uPA)onintervertebraldisc，approachitspossiblee

5、ffectsinIntervertebraldiscdegeneration。.Methods:Seventy-twohealthrabbits，2.5-3.0Kg,wererandomlydividedintothreegroups,includingblankcontrolgroup（8）、uPAgroup（48）andNaclgroup（16）.Experimentalgrouprandomlydividedintothreesubsection.ExposureL4/5intervertebraldiscsinabdominalvertebralatero-anterior

6、aspectbyinverseeighthoroscopeoperandimodus.Discernlyinjec10、20、40ng/µlurokinase-typeplasminogenactivator(uPA)1µl.Negativecontrol(NaClgroup):0.9%NaCl(1µl)wererespectivelyinjectedintoL4/5intervertebraldiscs.Theblankcontrolgroupweredonenothing.Thethree、sixweekafterpostop.,executeallgrouprabbitsan

7、ddislodgmentcorrespondingintervertebraldiscs.Observemacro-body,HEstaining,proteoglycanassayingandexpressionofMMP-3onintervertebraldiscweredone.Results：(1)Underlightmicroscopetoobservetheexperimentalgroup,followingthetimeandinjectconcent