腺病毒介导的tgfβ1基因在兔髓核细胞中的表达

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1、第28卷第11期第三军医大学学报VoI.28，No.112006年6月ACTAACADEMIAEMEDICINAEMILITARISTERTIAEJun.20061209文章编号：1000-5404（2006）11-1209-03论著腺病毒介导的TGF-!1基因在兔髓核细胞中的表达李华壮，周跃，张传志，郭国宁，郭志良（第三军医大学新桥医院骨科，重庆400037）提要：目的检测腺病毒介导的转化生长因子（transforminggrowthfactor!1，TGF-!1）基因在兔髓核细胞中的表达及其对蛋白多糖的调节作用。方法体外分离培养兔髓核细胞，以腺病毒为载体将TGF-!

2、1基因转染至髓核细胞内，RT-PCR和免疫组化方法检测TGF-!1的表达，并检测其对髓核细胞基质中蛋白多糖含量的影响。结果兔髓核细胞贴壁及生长的速度均十分缓慢，Ad-TGF-!1转染的髓核细胞内可检测到TGF-!1基因的表达，并且可持续到8周，Ad-TGF-!1转染后的髓核细胞合成蛋白多糖的量增加。结论腺病毒介导的TGF-!1基因可以在髓核细胞内得到持续的表达，并且产生明显的生物学效应。关键词：转化生长因子!1；髓核细胞；表达中图法分类号：R323.4；R329.24；R394.8文献标识码：AExpressionofrecombinantadenovirus-medi

3、atedTGF-!1geneinrabbitnucleuspul-posuscellsLIHua-zhuang，ZHOUYue，ZHANGChuan-zhi，GUOGuo-ning，GUOZhi-Iiang（DepartmentofOrthopaedics，XingiaoHos-pitaI，ThirdMiIitaryMedicaIUniversity，Chongging400037，China）Abstract：ObjectiveTodetecttheexpressionoftransforminggrowthfactor!（1TGF-!1）genemediatedby

4、adenovirusinrabbitnucIeuspuIposusceIIsanditsbioIogicaIeffectsonproteogIycans.MethodsTherabbitnucIeuspuIposusceIIswereisoIatedandcuIturedinuitro.AftertransducedintotherabbitnucIeuspuIposusceIIsmediatedbyadenovirus，theexpressionofTGF-!1genewasevaIuatedwithRT-PCRandimmunohisto-chemicaImetho

5、dsanditsbioIogicaIeffectsonproteogIycanswasevaIuated.ResultsTheamountofnucIeuspuIposusceIIscuIturedinuitroincreasedsIowIy.TheexpressionofTGF-!1genecouIdbedetectedinthenucIe-uspuIposusceIIstransfectedwithAd-TGF-!1，andpersisted8weeks.ThecontentofproteogIycanssynthesizedbynucIeuspuIposusceI

6、IsincreasedwhentansfectedwithAd-TGF-!1.ConclusionTheTGF-!1genemedia-tedbyadenoviruscouIdpersistentIyexpressinnucIeuspuIposusceIIs，andproducebioIogicaIeffectsonnucIeuspuIposusceIIs.Keywords：transforminggrowthfactor!1；nucIeuspuIposusceIIs；expression椎间盘退变是影响人类健康的常见病，一旦开始外培养的兔髓核细胞中，检测其表达及生物学

7、效应。退变，则难以逆转。近年来对椎间盘退变的分子生物为用基因强化组织工程学（gene-enhancedtissueengi-学发病机制进行了大量的研究。虽其确切的发病机制neering）技术高质量地修复退变椎间盘提供实验依据。尚不清楚，但大多数学者认为：细胞因子减少和炎症因1材料与方法子增多，导致基质金属蛋白酶活性增加，细胞外基质降解加速，髓核进行性脱水，椎间盘细胞生存的内环境被1.1兔髓核细胞的分离及原代培养破坏，出现了椎间盘退变，提出应用基因治疗和组织工4周龄日本大耳白兔10只（第三军医大学新桥医院实验程相结合的椎间盘再生治疗新思路［