扶正抑瘤颗粒药物血清诱导小鼠肝癌细胞凋亡及其机制的研究_1

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1、扶正抑瘤颗粒药物血清诱导小鼠肝癌细胞凋亡及其机制的研究作者：赵健雄，程卫东，徐瑞峰，李元青【关键词】,扶正抑瘤颗粒［摘要］目的：研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用扶正抑瘤颗粒药物血清，温育体外培养的H22小鼠肝癌细胞。流式细胞仪进行细胞周期分析，检测凋亡率；透射电镜观察细胞超微结构变化；链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物免疫细胞化学法观察凋亡相关蛋白Bcl2和Bax的变化。结果：扶正抑瘤颗粒药物血清可影响细胞周期，使小鼠肝癌H22细胞的增殖阻滞在G1/G0期，并可测到凋亡峰，同时可下调Bcl2蛋白的表达，上调Bax蛋白的表达。结论：

2、扶正抑瘤颗粒可通过影响细胞生长周期，调节Bcl2和Bax蛋白的表达诱导小鼠肝癌细胞凋亡。［关键词］扶正抑瘤颗粒;细胞凋亡;细胞周期;原癌基因蛋白质cbcl2;BaxEffectsofFuzhengYiliuGranulemedicatedserumonapoptosisoflivercancercellsfrommiceanditsmechanismABSTRACTObjective:TostudytheeffectsofFuzhengYiliuGranule(FZYLG)medicatedserumonapoptosisoflivercancercellsH2frommicean

3、ditsmechanism.Methods:LivercancercellsH2frommicewereincubatedinculturemediacontainingserafromrabbitsmedicatedwithdifferentdosesofFZYLG.FlowcytometrywasusedtoexaminethecellcycleandanalyzetheapoptoticrateoftheH2cells.ThemorphologicalchangesoftheH2cellswereobservedbytransmissionelectronmicroscope

4、andtheapoptosisrelatedprotEinsBclandBaxwereexaminedbystreptavidinbiotinperoxidasecomplex(SABC):FZYLGmedicatedserumcouldinfluencethecellcycleandstoptheproliferationofH2cellsattheG1/G0phasewithapoptoticpeakbEIngdetected.InculturemediawithFZYLGmedicatedsera,theexpressionofBcldecreasedwhilethatofB

5、axincreasedascomparedwiththatinculturemediumwithnonmedicatedserum(PKEYWORDSFuzhengYiliuGranules;apoptosis;cellcycle;protooncogeneproteinscbcl2;Bax抑制肿瘤细胞生长和促进其凋亡是许多抗肿瘤药物的作用机制之一。我们研制的扶正抑瘤颗粒具有扶正祛邪、化瘀解毒之功效。体内实验和临床研究发现，该药有较好的抗癌作用［1,2］，但对其抗癌机制尚缺乏深入研究。本文通过血清药理学方法，进一步观察该药对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用，并从分子、细胞学水平探讨其抗

6、癌机制。　1材料与方法实验动物纯种新西兰家兔20只，雄性，体质量～，中国兰州生物制品研究所动物室提供，合格证号14004；清洁级昆明种小鼠20只，体质量18～2g，兰州医学院动物实验中心提供，合格证号14005。药物扶正抑瘤颗粒由红芪、当归、墓头回、莪术按∶1∶3∶1的比例组方，甘肃省药材公司提供生药，兰州佛慈制药厂按标准工艺制成浓缩颗粒，烘干后装袋，g/袋。复方天仙胶囊，/粒，吉林通化长白山药业股份有限公司生产，批号03010543。仪器与试剂CO2培养箱，日本三洋电机株式会社产品；流式细胞仪，美国BectonDickinson公司产品；倒置相差显微镜和普通光学显微镜，日本Oly

7、mpus公司产品；JEM100CX透射电子显微镜，日本电子株式会社产品；RPMI1640培养基，美国GIBCO公司产品；小牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品；碘化丙啶，TritonX100，RNaseA均为Sigma公司产品；链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物法免疫组化试剂盒及多克隆抗体，武汉博士德公司产品。细胞培养小鼠肝癌H22细胞由兰州医学院药理学教研室惠赠。常规接种于昆明种小鼠腹腔保种。实验前，取腹腔接种d的小鼠乳白色腹水，用PBS液漂洗1次后调整细胞浓度