扶正抑瘤颗粒药物血清诱导小鼠肝癌细胞凋亡及其机制的研究

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1、扶正抑瘤颗粒药物血清诱导小鼠肝癌细胞凋亡及其机制的研究作者：赵健雄，程卫东，徐瑞峰，李元青【关键词】,扶正抑瘤颗粒［摘要］目的：研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用扶正抑瘤颗粒药物血清，温育体外培养的H22小鼠肝癌细胞。流式细胞仪进行细胞周期分析，检测凋亡率；透射电镜观察细胞超微结构变化；链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物（streptavidinbiotinperoxidaseplex,SABC）免疫细胞化学法观察凋亡相关蛋白Bcl2和Bax的变化。结果：

2、扶正抑瘤颗粒药物血清可影响细胞周期，使小鼠肝癌H22细胞的增殖阻滞在G1/G0期，并可测到凋亡峰，同时可下调Bcl2蛋白的表达，上调Bax蛋白的表达（扶正抑瘤颗粒药物血清组与空白对照组比较，P<0.05）。结论：扶正抑瘤颗粒可通过影响细胞生长周期，调节Bcl2和Bax蛋白的表达诱导小鼠肝癌细胞凋亡。　　［关键词］扶正抑瘤颗粒;细胞凋亡;细胞周期;原癌基因蛋白质cbcl2;Bax　　EffectsofFuzhengYiliuGranulemedicatedserumonapoptosisofliver

3、cancercellsfrommiceanditsmechanism　　ABSTRACTObjective:TostudytheeffectsofFuzhengYiliuGranule(FZYLG)medicatedserumonapoptosisoflivercancercellsH22frommiceanditsmechanism.Methods:LivercancercellsH22frommiceediacontainingserafromrabbitsmedicatedetryinethecel

4、lcycleandanalyzetheapoptoticrateoftheH22cells.ThemorphologicalchangesoftheH22cellsissionelectronmicroscopeandtheapoptosisrelatedprotEinsBcl2andBaxinedbystreptavidinbiotinperoxidaseplex(SABC)method.Results:FZYLGmedicatedserumcouldinfluencethecellcycleandst

5、optheproliferationofH22cellsattheG1/G0phaseediaedicatedsera,theexpressionofBcl2decreasedediumedicatedserum(P<0.05).Conclusion:FZYLGmedicatedserumcaninduceapoptosisofthelivercancercellsH22byinfluencingthecellcycle,dopus公司产品；JEM100CX透射电子显微镜，日本电子株式会社产品；RP

6、MI1640培养基，美国GIBCO公司产品；小牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品；碘化丙啶，TritonX100，RNaseA均为Sigma公司产品；链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物（streptavidinbiotinperoxidaseplex,SABC）法免疫组化试剂盒及多克隆抗体，武汉博士德公司产品。　　1.4细胞培养小鼠肝癌H22细胞由兰州医学院药理学教研室惠赠。常规接种于昆明种小鼠腹腔保种。实验前，取腹腔接种7d的小鼠乳白色腹水，用PBS液漂洗1次后调整细胞浓度为（1～5）×105/m

7、l，转种于含10%小牛血清的RPMI1640完全培养基中（内含青霉素、链霉素各100U/ml），于37℃，5%CO2饱和湿度条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。　　1.5药物血清制备纯种新西兰家兔20只，随机分成5组：空白对照组、FZYLG大、中、小剂量组和天仙胶囊组。空白对照组予以灌服生理盐水；FZYLG大、中、小剂量组分别按9、4.5、2.25g・kg1・d1予以FZYLG灌胃（FZYLG中剂量=临床常用量×动物等效面积系数×培养基内血清稀释度；大剂量=中剂量×2；小剂量

8、=中剂量/2）；天仙胶囊组予以复方天仙胶囊0.375g・kg1・d1灌胃（按人体等效剂量×培养基内血清稀释度计算）。各组均每日分2次等体积灌胃（灌药前禁食4h，自由取水），共3d。于末次灌胃后2h心脏采血，室温下静置4h，2400r/min离心10min，分离血清，0.22μm微孔滤膜无菌过滤后，置－20℃冰箱保存备用。　　1.6细胞周期及凋亡分析取对数生长期细胞，用空白RPMI1640培养基调整细