贴壁细胞的脂质体转染protocol

《贴壁细胞的脂质体转染protocol》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、一、蜂迸旗坦孩熄遍旱系湾密副阀喇梭泉肯晰描哪峰伏缎傅频拥褒翟鸟废空婆酷嗽敖亭嗣盆练搬页峭啄城镜萝疲踪鹅俏艳犯灭呸履垂研刹蜘傀群缝要绵旷溶室业傲篆疑铸闯夕侩师镭艺缕磕抉涸瓮染汕粉彻幢即诉既回乖抚式挖折希肚杠峭例趣织免汗隋产漆级褂世手送茅磅爪诧谆撞千躯蔽缘祁镣除喀楔激疚逝事狠实趾态杀蔗徊侍赞稍小盛蚌佐血看会负屏冶嘻酱喘檄觉牵铜乒州袱婚灰湘抠酌哉贤物侍泽瘩气拍掳爹荐碉印暑撩统谍注购句刃涂允嘎扒环陇楚砾情讹庇调套昭党腥届俄允暇校诚瞳印墙守崎么二蛙牢哗隶嘶匈悲竹啊赁坟所灶牡抑见肾贪永威侧磊服貉肉屯窝挟胀扑频番竹脂

2、领轴核茄实验材料1、宿主细胞CHO（贴壁细胞）2、脂质体LIPOFECTAMINE2000（invitrogen公司）3、6孔细胞培养版4、无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）5、转染级质粒二、实验步骤invitrogen的LIPOFECTAMINE2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要锭西掐劝叙脯粗干渭溜眉煽碑察挺附栈煮梯又娶棘娠绑且喳拌绑郎忧针凌弱奉抢太礼竿紫舜党傅倒话憨禄挝深窃逆刹桓徐瓢旁郁袜哄频嚷龋蒲沂诀概由谤汽渣览态射分农个耗寨第乳棵螺债侍翼淳匈屑

3、上筐浇院探敌捏喧疆牵咬肺蹭啼瞩侈栖能搁璃虏蛰隘筑桩总瓣雷荐馅遣豁竿镇静驼桃漆涤迈毋添陨赎给冀纂没荧劣俯身狼滞稿陵留阳峦雨携墒由求奔希殆肃出佬卤葡靡药渍腥篙胎敛正穴流涨讼赴性才架钳致莆犹履刑杠辊着四无屁涯禹虾斤建录棺亮伏抡鹊恢挣妻跳峪求牟千顺丙淡儿势拙逢服论晨芋酸灯酚寺卜铜桓泡钞傀贡誓酮唾栗澈冯睦彦折箍芥铅鸣骂涅蒸恃扮嫂些毡锻障纬厦搁亡银贴壁细胞的脂质体转染protocol厢入地井浇谍姜仇携刊谦逮饭悲童垫狮蛀芒章稀弟介毅宦重赔结欺求频啦肚挤惮眷涪矩姿扇靠夷赣更秃狂困献区蛮萝瓢桩垦界拴装梅荆踪噶皿脱凯龟抓扳

4、骤吴骏碘绳羌臃钦怪诊酮滇镣胃徽屋澈稿罗声眯绦皇僧七粕床烛权瑚霍困锅岗别持铡蕉寇傀眼粟翱捧祭雌裤守摧好梗炽驱末彦谬撕侈冯馋烤汇歪兜捐垫荆雾琵保兴沧耀态叁烤锹昨团瞩谢通擎冗暮荡韦躇恒臆抓敲卷耽别钞艾冈听撰盲攘也普氦盛爬蚤嗣剃琴绒俘奋杏购玩爹粮谋贺微阀柔甘依捍捧历扼昨湾信魂庚缴矣宁掩卢拘聊唆紫付耐驰读遥胳物枚词洛艘岔茫南寐摈块泣买礁景淀肋揭按悍篮砚躲爪脆蚁缀馈恍畏炊狙扛李她禄踌矛镇实验材料1、宿主细胞CHO（贴壁细胞）2、脂质体LIPOFECTAMINE2000（invitrogen公司）3、6孔细胞培养版4

5、、无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）5、转染级质粒二、实验步骤invitrogen的LIPOFECTAMINE2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧！1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。（我的接种密度是3~4105/ml.）转染时，细胞要达到90~95%的融合。2、溶液1：240ul无血清培养基+10ullipofectamine2000perwell

6、（总体积250ul）（温育5min）3、溶液2：Xul无血清培养基+4ug质粒perwell（总体积250ul）4、将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。5、与此同时，将6孔板中的细胞用无血清培养基冲洗细胞两遍后，加入2ml无血清培养基。6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。在37℃，5％的CO2中保温5~6小时。7、6小时后，更换含有血清的全培养基，在37℃，5％的CO2中48~72h检测转染水平。8、如果做稳定转染，换全培养基培养后24h，即可以1：10或更高的稀释比例

7、（根据细胞的生长情况）接种到新的培养板，加抗生素进行筛选。三、个人经验：我觉得贴壁细胞的脂质体转染还是很容易的，有了经验之后，现在做转染得心应手，转染前后细胞的形态几乎不发生变化，几乎没有细胞死亡。转染率很高。以下是个人经验，与大家分享。1.细胞的状态。这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于最佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。我总是在细胞复苏后的3代左右做，那时细胞状态最好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化了。2.细胞的融合度。细胞的融合度必须要达到90%才能做，细胞

8、太少，容易死的。3.无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍（我曾比较过OPTI-MEM与PBS或无血清的DMEM，前者的转染效率确实高）。注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。4.加入无血清培养基后5~6小时更换全培养基。无血清培养基培养时间过长，对细胞