戊四氮诱导发育鼠癫

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1、戊四氮诱导发育鼠癫　　关键词:发育鼠;癫持续状态;突触素;齿状回;MK-801　　Abstract:ObjectiveTostudythesynapticreorganizationofhippocampalformationafterpentyleetrazol-inducedsta-tusepilepticusindevelopingratsandtheeffectofNMDAreceptorantagonistMK-801onit.MethodsTheopticaldensity（A）ofsynaptophysin（p38）immunoreactivepro

2、ductinedbyimagepatternanalysisinthehippocampusofdevelopingratsassociatedent.ResultsTheAofp38positiveim-munoreactiveproductinhippocmpalformationintheepilepticgroupossyfiberlayeroftheCA3andtheinnermolecularlayerofthedentategyrus.TheAinMK-801groupaybetheresultfromthestatusepilepticus，aso

3、lecularbasisoftherepeatedseizures.NMDAreceptorsplayanimportantroleinthesynapticreorganization.　　Keya公司产品。　　1.2方法　　1.2.1癫持续状态模型的建立和分组处理各日龄大鼠的SE组与MK-801组腹腔内注射PTZ（80mg.kg，用生理盐水稀释成100g.L），发作开始时的表现按Lado幼鼠癫发作分级标准［3］评价，均达到3.5～8级发作，呈癫持续状态，发作1h2组均给予地西泮腹腔内注射（10mg.kg）以终止发作，MK-801组给地西泮同时腹腔内注射MK-8

4、01，剂量为1mg.kg（用生理盐水稀释成0.5g.L）。各日龄大鼠NS组用与PTZ等体积的生理盐水腹腔内注射，1h后亦给予同剂量的地西泮腹腔注射。所有大鼠均在同一实验室和动物中心操作和喂养，以保持喂养、光照、噪声等条件相同，减少外界干扰造成的差异。　　1.2.2组织切片的制备4个日龄组分别于发作后第7、14、28天（每一时间点各组均为6只）腹腔内注射10%水合氯醛（0.35ml.kg）麻醉，4%多聚甲醛左心灌注固定取脑。在海马部位做连续冠状冰冻切片，切片厚30μm，每隔2张取1张切片，每例标本（双侧海马结构）取切片不少于8张。　　1.2.3免疫组织化学染色以鼠抗

5、p38单克隆抗体（1∶100）作为一抗，采用SP法行p38免疫组织化学染色，用DAB和H2O2呈色，自来水冲洗，贴片，脱水，透明，封片。棕黄色着色为阳性。阴性对照试验以PBS代替一抗，其余染色步骤相同。　　1.2.4结果判定p38免疫反应产物的标记强度以光密度值（A）表示，应用LEICAQin进入潜伏期，由自由活动状态逐渐转为安静、呼吸加快，很快出现癫发作，渐次出现连续点头、前肢阵挛、后退、摔倒;7～8级发作的大鼠则表现为狂奔嘶叫、全身强直-阵挛性发作，同时伴有全身青紫。NS组大鼠无行为学改变。　　2.2p38免疫反应产物　　2.2.1NS组NS组切片的海马结构内

6、p38免疫反应产物呈板层样分布，神经毡内免疫反应产物呈特异性点状或颗粒状沉积，多为细颗粒状沉积，神经元胞质、胶质细胞、血管及白质不被染色。在海马CA3区苔藓纤维层内，深染的颗粒状免疫反应产物较为均匀分布，整体呈月牙形（图1A）。在齿状回内分子层内带染色最深，颗粒细胞轮廓边缘也有点状反应产物沉积（图1B）。阴性对照实验切片无特征性免疫反应产物。各日龄组切片经分析比较，14、21与28日龄鼠的p38的表达逐渐增加，且两两比较有显著性差异（P<0.05），但35、42、49、56日龄鼠较28日龄鼠均无显著性差异（P>0.05）。图2示NS组不同日龄鼠p38的

7、表达趋势。　　图1海马结构内突触素p38免疫反应产物（略）　　A:箭头示CA3区苔藓纤维层（免疫组化染色，×100）B:箭头示齿状回分子层内带（免疫组化染色，×40）　　图2NS组不同日龄鼠p38的表达趋势（略）　　2.2.2SE组与MK-801组SE组海马结构内p38免疫反应产物的分布特征无明显变化。定量结果显示，各日龄组在癫发作后各个时间点海马CA3区苔藓纤维层、齿状回分子层内带p38免疫反应产物CA值显著增加（P<0.05），其中均以发作后14天增加达最高峰。　　MK-801组齿状回分子层内带及CA3区苔藓纤维层p38免疫反应产物CA值较各日龄SE组各

8、个时间点均