粪大肠菌群及多管发酵法检测探析

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1、粪大肠菌群及多管发酵法检测探析　　摘要：随着人们环保意识的增强，加强环境中各种细菌的检验、掌握环境污染状况，受到越来越多人的关注。粪大肠菌群检测是水质监测的主要内容之一，有助于环境评定及卫生监督工作的顺利开展。该文对粪大肠菌群及多管发酵法检测进行探讨，以供参考。　　关键词：粪大肠菌群多管发酵法检测探析　　中图分类号：X832文献标识码：A文章编号：1674-098X（2017）01（b）-0093-02　　粪大肠菌群是评定水体受粪便污染程度的重要指标，注重对其检测在卫生学上具有重要意义。多管发酵是检测粪大肠菌群的方法之一

2、，对其进行研究，有助于提高检测结果精度，为其更好地推广应用奠定基础。　　1粪大肠菌群检测价值　　粪大肠菌群指在44.5℃温度条件培养下，24h能发酵产生乳糖产酸产气需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。其主要生存在人与温血动物肠道中，与粪便一起排出体外，其数量直接反映水体受粪便污染程度。我国于1992年将粪大肠菌群检测纳入生活饮用水检测指标，同时，于2014年6月对食品安全国家标准进行修订，将粪大肠菌群列为微生物检测的强制检测内容。粪大肠菌群检测价值体现在诸多方面，不仅为水体的评定提供参考，而且在卫生监督工作中发挥重要作用

3、，有助于人们加强对粪便的管理，改善环境卫生条件，为人们的生命健康提供保障。　　2多管发酵法检测研究　　2.1培养基及试剂制备　　检测中使用的单倍乳糖蛋白胨培养液制备方法为：分别取氯化钠、乳糖、牛肉浸膏、蛋白胨各5g、5g、3g、10g加热溶解在1000mL的蒸馏水中，将溶液的pH值调节为7.2～7.4，而后向其中加入1mL1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装在试管中使用高压灭菌器在115℃温度条件下灭菌20min，在冷暗处储存，以备后用。配置3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的方法，与配置单倍乳糖蛋白胨培养液的方法相似，区别在

4、于除蒸馏水外，将各组分的用量增加3倍。　　EC培养液的配置方法为：使用5g氯化钠、1.5g磷酸二氢钾、4g磷酸氢二钾、1.5g胆盐三号、5g乳糖、20g胰胨，1000mL蒸馏水加热溶解，分装在含油玻璃导管的试管中。放置于高压蒸汽灭菌器中将温度调制115℃进行20min的灭菌处理，灭菌后将pH调为6.9。　　为保证检测结果存放培养基时应注意：处于密封瓶中的脱水培养基成品应在温度低于30℃、湿度低的暗处存放，尤其防止阳光直射。同时，还应防止液体蒸发及杂菌侵入，当发现培养液体积明显改变，或颜色改变时应禁止使用。　　2.2检测步

5、骤　　（1）水样接种量的确定。　　充分混匀水样，结合水样污染程度，明确水样接种量，尤其应保证各样品使用至少3个不同水样量接种，保证同一接种水样量有5管。未受污染水样接种量取0.1mL、1mL、10mL。依据污染程度受污染水样接种量取0.01mL、0.1mL、1mL。另外应注意，当接种体积为10mL时，应在试管中装3倍浓度5mL乳糖蛋白胨培养液，当接种量≤1mL时可使用10mL普通浓度的乳糖蛋白胨培养液进行接种。　　（2）初发酵实验。　　在盛有乳糖蛋白胨培养液发酵管中接种水样，在（37±0.5）℃温度条件下，培养（24±2

6、）h。操作中应注意，水样加入前使用酒精灯消毒培养管管口，加入水样后消毒封口。发酵24h后观察培养管，阳性判别的标准为培养管既产气又产酸，即有气泡产生且颜色由紫色变为黄色为阳性。当导管气泡不够明显时，可用手轻拍，看是否有气泡产生。　　（3）复发酵实验。　　取判定为阳性的发酵管轻微振荡，使用灭菌棒或3mm接种环将培养物转移到CE培养液中。在（44.5±0.5）℃温度条件下培养（24±2）h。接种操作完成后在30min内将发酵管放进水浴中。培养后及时进行观察，当发酵管产气则可判定为粪大肠菌群阳性。　　（4）结果计算。　　根据不

7、同接种量发酵管阳性结果数目，查阅相关表格得出每升水样含有的粪大肠菌群。　　3多管发酵法质量控制　　使用多管发酵法检测粪大肠菌群时，所受的影响因素较多，稍有不慎容易导致检测结果的不准确，因此，为保证检测结果的准确性应注重从人员技能、计量器、培养条件、培养基、样品均匀性等方面采取相关措施，做好质量控制。　　3.1提高检测人员水平　　检测中检测人员不规范操作往往给检测结果产生直接影响，因此，为避免检测结果受检测人员水平的影响，一方面，检测作业前应组织检测人员加强检测规范的学习，使其明确各检测步骤及相关检测参数。另一方面，做好检

8、测培训工作，讲解检测的方法与技巧，使参与检测的人员明确检测中的重点，尤其防止违规行为的出现。　　3.2保证实验设备质量　　实验所用设备性能同样会给检测结果产生影响，因此，开展检测工作时应加强所用设备质量的控制，尤其应注意：首先，每天对恒温培养箱进行检查，认真记录培养架使用区稳定，确保其稳定、准确，温度变化应在±0.5